微囊藻毒素-LR通过PI3K/AKT信号通路促进黑色素瘤细胞侵袭和肿瘤转移

发布时间：2021-04-17 21:37

　　目的：微囊藻毒素MC-LR是蓝藻分泌的一种七环肽次级代谢产物,越来越多的证据表明,微囊藻毒素-LR可以促进人类肿瘤发生。而我们之前的研究已经证明微囊藻毒素-LR可以促进黑色素瘤细胞系MDA-MB-435的侵袭,但是进一步的分子机制并不是十分清楚。本研究旨在通过体外和体内实验证明微囊藻毒素-LR促进黑色素瘤细胞侵袭的分子机制。方法：1、Western blot方法检测不同浓度的微囊藻毒素-LR（0,5,12.5,25,50nM）处理黑色素瘤细胞系MDA-MB-435,pAKT/AKT蛋白表达变化以及负向调节PI3-K/AKT信号通路的PTEN蛋白表达情况。2、进一步通过添加PI3-K/AKT抑制剂LY294002,荧光素酶报告基因方法检测LY294002是否逆转了MMP-2/-9的启动子活性；Western blot方法在蛋白水平检测微囊藻毒素-LR促进的MMP-2/-9的过表达是否被逆转；通过transwell方法检测微囊藻毒素-LR促进的肿瘤侵袭是否被逆转。3、用siRNA干扰AKT表达,通过transwell实验检测微囊藻毒素-LR促进的肿瘤侵袭是否被逆转。4、在裸鼠水平上通过皮下... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

微囊藻毒素-LR对于MDA-MB-435异种移植裸鼠体重的影响

微囊藻毒素-LR对于MDA-MB-435肿瘤体积和重量的影响

学方法来检测MMP-2/-9的mRNA水平和蛋白水平的变化。实时定量PCR结果(图5.1)表明：通过微囊藻毒素-LR灌胃处理组的裸鼠肿瘤内MMP-2/-9的mRNA水平相对于对照组都增高了（p<0.05)。免疫组织化学结果同样是微囊藻毒素-LR处理组肿瘤内MMP-2/-9的蛋白表达水平相对于对照组增加了(图5.2)(图5.3)(p<0.05)o这个结果趋势与实时定量PCR的结果一致。只是MMP-2/-9蛋白表达量在低浓度和中浓度微囊藻毒素-LR处理组表现出剂量依赖性，然而高浓度微囊藻毒素-LR剂量组MMP-2/-9蛋白表达量反而下降了。AKT的激活对于PI3-K/AKT通路在肿瘤侵袭转移中所起作用是很重要的，因此我们进一步用石蜡切片通过免疫组织化学方法检测pAKT的表达情况(图5.4)。结果表明：与对照组相比，微囊藻毒素-LR处理组的pAKT的蛋白表达量显著上调了（p<().05),这与我们体外实验结果是一致的。2.5 ■MMP2| ，□ MMP9 ；■0 * **I: m nil 110 0.001 0.01 0.1图5.1微囊藻毒素-LR在MDA-MB-435肿瘤内促进MMP-2/-9 mRNA水平表达取不同处理组(control组、低浓度组(O.OOlmg/kg/d)、中浓度组(0.01 mg/kg/d)和高浓度组（0.1 mg/kg/d))肿瘤组织勾装破碎后提取RNA，逆转录为cDNA后，通过实时定量PCR实验检测各组织中MMP-2/-9的mRNA水平变化，以GAPDH为内参。实验结果通过单因素方差分析方法（ANOVA)检验（*表示与对照组相比P < 0.05

【参考文献】：
期刊论文
[1]微囊藻毒素促肝癌过程中肝细胞bcl-2及bax基因表达研究[J]. 胡志坚,陈华,孙昌盛,李一伟,高凌云.  中华预防医学杂志. 2002(04)
[2]Relationship Between Microcystin in Drinking Water and Colorectal Cancer[J]. ZHOU LUN*2, YU HAI+ AND CHEN KUN§ *Cancer Institute, Zhejiang University,;+School of Medicine, Zhejiang University; §School of Public Health, Zhejiang University, Hangzhou 310009, China.  Biomedical and Environmental Sciences. 2002(02)



本文编号：3144181