miR-548a-3p通过靶向PPP3R1在IL-22介导角质形成细胞增殖中的作用

发布时间：2021-06-16 08:56

　　目的:本研究基于IL-22介导的角质形成细胞中miRNAs及mRNAs的差异表达,在miRNA及mRNA表达谱芯片前期研究的基础上,检测miR-548a-3p对角质形成细胞的生物学功能及其靶基因,进而从表观遗传学角度进一步探究IL-22诱导下microRNA对角质形成细胞增殖作用的分子机制。方法:（1）将人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞株）分为实验组和对照组,分别给予100 ng/ml的IL-22刺激24h和零刺激,实验重复3次。而后使用RNAiso Plus试剂提取细胞总RNA,并检测其浓度和纯度,以确保可在此后实验中使用;（2）从表达谱芯片结果中选取某目标差异miRNA,并选择U6为内参照,对此目标差异miRNA的芯片结果,通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法进行验证,以2-△△Ct法计算数据相对表达量,分别进行3次独立实验;根据入选标准,选择6例寻常型银屑病患者及6例正常人对照,分别对其皮损和皮肤组织样本,采用RT-qPCR法进行rniRNA的分子表达检测,同样用2-△△Ct法表示;（3）向HaCaT细胞中,分别加入模拟物、抑制物、模拟物和抑制物的阴性对照进行转染,并实... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１：?ＲＴ－ｑＰＣＲ结果表明，ＩＬ－２２刺激ＨａＣａＴ细胞２４ｈ后可使ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ表达水??平显著上调，明显高于对照组（Ｐ＜〇．〇５）

图２：?ＲＴ－ｑＰＣＲ结果也表明，可使６例寻常型银屑病患者皮损中ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ表达??水平较６例正常对照显著上调（Ｐ＜０．０５）

图３：用ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ?ｍｉｍｉｃｓ和ｍｉｍｉｃｓ?ＮＣ转染ＨａＣａＴ细胞，分别于转染后２４ｈ、??４８ｈ、７２ｈ收集细胞，采用ｑＲＴ－ＰＣＲ法检测ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ的表达情况，以验证转染??是否成功。结果表明，ｍｉｍｉｃｓ组ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ表达与转染ｍｉｍｉｃｓ?ＮＣ组相比明显增??加，其中４８ｈ时转染效果最好（Ｐ＜０．０５）。??

【参考文献】：
期刊论文
[1]银屑病的流行病学与危险因素[J]. 张建中.  实用医院临床杂志. 2013(01)
[2]The Expression of Interleukin-22 and S100A7, A8, A9 mRNA in Patients with Psoriasis Vulgaris[J]. 刘厚君,黄琨,吴艳,林能兴,李家文,涂亚庭.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2007(05)
[3]全国1984年银屑病流行调查报告[J]. 全国银屑病流行调查组,邵长庚,张国威,包寅德,蒋仲元,韩国柱,顾恒.  皮肤病与性病. 1989(01)

博士论文
[1]C/EBPα调控角质形成细胞增殖和分化在寻常型银屑病皮损形成中的作用[D]. 马伟元.山东大学 2014

硕士论文
[1]miR-122-5p通过靶向Sprouty2在IL-22介导角质形成细胞增殖中的作用[D]. 江萌.山东大学 2016



本文编号：3232776