视蛋白3在紫外线A诱导光老化中的作用及机制研究

发布时间：2021-06-20 10:09

　　目的:检测视蛋白（opsins,OPNs）是否在人皮肤成纤维细胞中表达,进一步探索OPNs是否参与调控紫外线A（UVA）诱导的光老化形成,并明确其分子调控机制。方法:贴壁法分离培养人原代皮肤成纤维细胞,传至第3代,利用形态学观察、特异性波形蛋白荧光染色鉴定后进行后续实验。免疫荧光检测OPNs在成纤维细胞中的表达及定位;实时荧光定量PCR（Real-time PCR,RT-PCR）检测OPNs的核酸水平;蛋白质印迹法（Western-blot）在蛋白水平上验证OPNs的表达。不同剂量UVA照射人皮肤成纤维细胞后,形态学观察细胞状态,并利用CCK8检测细胞存活率,Western-blot检测照射后OPNs的表达变化;根据CCK8及OPNs表达变化的结果,以10J/cm² UVA反复照射人皮肤成纤维细胞,构建成纤维细胞光老化模型;通过形态学、细胞周期及β半乳糖苷酶染色确定光老化模型建立成功。利用Western-blot检测OPN3、基质金属蛋白酶-1（Matrix metalloproteinase-1,MMP1）及基质金属蛋白酶-3（Matrix metallopro... 

【文章来源】：贵州医科大学贵州省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

至3代成纤维细胞(倒置显微镜×100)

后细胞形态较清楚，胞体细长呈长梭形，核卵圆形居中，细胞呈栅栏状及生长(图 1c)。免疫荧光染色显示：培养的细胞核呈蓝色，卵圆形，胞质荧光，Vimentin 表达阳性（图 2）。图 1 1 至 3 代成纤维细胞(倒置显微镜×100)Fig.1 1 to 3 generation fibroblasts（Inverted microscope×100）

贵州医科大学 2019 届科学学位硕士研究生学位论文N3 在人皮肤成纤维细胞中的高表达验证 OPNs 在人皮肤成纤维细胞中的表达，首先使用免疫荧光法检白表达及定位。结果显示：视蛋白呈半圆形或圆形位于成纤维细胞。RT-PCR 和 Western blot 分别在 mRNA 和蛋白水平证实了视蛋白 OPN3 在蛋白及基因水平表达显著高于其他视蛋白表达水平（P＜0，可能 OPN3 在成纤维细胞中发挥重要的作用。


本文编号：3238994