黑色素瘤A-375细胞诱导表皮干细胞向间质细胞转型的研究

发布时间：2021-07-08 19:37

　　随着对肿瘤干细胞研究的不断深入,越来越多的证据提示肿瘤中某些细胞具有干细胞特性,并提出了肿瘤干细胞的学说,该学说的一个关键点是细胞微环境（cell niche）的改变是干细胞分化受阻的主要原因。在本研究中我们首先探讨黑色素瘤A-375细胞对表皮干细胞的诱导作用,建立体外诱导表皮干细胞恶性转化的共培养模型,发现表皮干细胞经黑色素瘤细胞直接诱导后,具有肿瘤细胞的相关生物学特性,这为肿瘤微环境可以造成干细胞自我更新能力的失控提供了一定的依据。基于此基础上,我们进一步研究了黑色素瘤细胞对潜在致癌的表皮干细胞的诱导作用,通过肿瘤相关抗原检测利裸鼠功能试验证明潜在致癌的表皮干细胞经黑色素瘤细胞诱导后可致裸鼠黑色素瘤。最后初步探讨表皮干细胞向间质细胞转型的机制,主要针对TGF-B信号通路及其下游分子p-smad2/3和E-cadherin的关系在表皮干细胞EMT过程中的作用及其机制的研究。 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

-375的培养和鉴定

该共培养体系及 HEMSC 单独培养对照组中 A375 和 HEESC 的数量在各时间点（1-7d）间无显著变化（见图3）。相差显微镜下观察到接触共培养组在共培养 4d 时有克隆出现，7d 时可见明显的克隆；共培养 7d 后的 HEESC 于正常培养基培养中贴壁后可见部分细胞变为梭形，这说明 A-375 诱导后 HEESC 接触抑制开始丧失，而在其他两组未观察到此现象（图 3）。在 1、3、5、7d 用免疫荧光法检测各组 HEESC 中 E-cadherin 和 p53 表达情况。结果表明接触共培养组中 A-375 诱导后 HEESC 表达 E－钙粘蛋白的图 2 HEESC 的培养和鉴定A：相差显微镜下 30-50%汇合的 HEMSC；B：相差显微镜下单层汇合的 HEMSC；C：免疫荧光法检测 HEESC 中 p63；D：免疫荧光法检测 HEESC 中β1-integrin；Fig 2 Culture and identification of HEESCA：30-50% confluent HEESC, under phase-contrast microscope；B：confluent HEESC, under phase-contrast microscope；C：p63n in HEMSC detected by immunofluorescence method；D：β1-integrin detected by immunofluorescence method

表 3：统计学方法分析不同时间点 E-cadherin 的蛋白表达情况表 4：统计学方法分析不同时间点 PCNA 的蛋白表达情况Lane E-G：indirect contact co-cultured HEMSC in in 3d，5d and 7d sequentially；LaneH：DMBA treated HEESC00.20.40.60.811.2A B C D E F G H00.10.20.30.40.5


本文编号：3272207