重组IL-7/CCL21腺病毒的构建及其对小鼠黑色素瘤的体内实验研究

发布时间：2021-07-31 22:52

　　第一部分pAdenoG-CMV-IL-7-SV40-CCL21腺病毒载体的构建目的建立IL-7、CCL21双基因表达腺病毒载体,使之能在鼠源黑色素瘤B16F10细胞中过表达,为后续实验提供基础。方法GenBank中查找目的基因序列,设计引物,PCR扩增目的基因片段,酶切载体后重组构建IL-7-CCL21-pDONR,转化大肠杆菌感受态细胞后进行重组菌的筛选,选择阳性克隆,扩大培养,提取质粒,验证正确后进行包装、收获、纯化、测定病毒滴度,转染B16F10细胞,采用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR）、酶联免疫吸附（ELISA）法测定目的基因表达情况。结果双酶切及测序结果证明目的基因正确插入载体中。转染HEK293细胞观察细胞状态,正常出毒。转染B16F10细胞后,与野生型细胞株相比较,基因在mRNA水平及蛋白水平均有过表达,且差异有显著性意义（P<0.05）。腺病毒包装成功,滴度测定为2.2×10¹¹ pfu/ml。结论Ad-IL-7-CCL21双基因腺病毒共表达载体构建成功,可在B16F10细胞中成功转染... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PCR产物琼脂糖凝胶电泳分析

酶切产物琼脂糖电泳分析

阳性克隆测序图

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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本文编号：3314326