热处理对黑素细胞和HaCaT细胞α-MSH分泌变化的研究

发布时间：2017-05-06 17:17

  本文关键词：热处理对黑素细胞和HaCaT细胞α-MSH分泌变化的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 黑素细胞功能活性的增强与众多细胞因子有关，其中阿黑皮素原（proopiomelanocortin，POMC）剪切后的α-黑素细胞刺激素（α-melanocyte-stimulatingHormone,α-MSH）是其中重要的一员。除黑素细胞外，与黑素细胞共同形成表皮黑素单元的角质形成细胞也可产生α-MSH。前期研究发现，热处理有引起皮肤色素沉着的积极作用，本实验研究热处理后人表皮黑素细胞及HaCaT细胞（人永生化的角质形成细胞）POMCmRNA及α-MSH蛋白的变化，进一步讨论热处理引起黑素细胞功能活性增强的调节机制。为了验证热处理通过α-MSH分泌的变化引起黑素细胞功能活性的增强，我们建立黑素细胞及HaCaT细胞的共培养模型，模拟体内黑素细胞生存环境；并在热处理前，在共培养模型中加入α-MSH抗体，测共培养模型中黑素含量及酪氨酸酶活性的变化。 方法 1.体外培养的黑素细胞及HaCaT细胞，分别给予热处理（42℃，每天60min,连续3d），采用实时荧光定量PCR法(real-timePCR,RT-PCR)检测两种细胞的POMCmRNA的变化，酶联免疫吸附法（ELISA）检测两种细胞分泌的α-MSH蛋白的变化。 2.建立黑素细胞及HaCaT细胞的共培养模型。 3.热处理前,在共培养模型中加入α-MSH抗体，热处理3天后，NAOH法测共培养模型中黑素含量，左旋多巴法（L-Dopa）测酪氨酸酶活性。 结果 1.分别热处理（42℃，每天60min,连续3d）黑素细胞及HaCaT细胞，RT-PCR法测POMCmRNA，结果黑素细胞加热组的POMCmRNA（1.24206±0.33464）较对照组（1.000）有统计学差异（P0.05），HaCaT细胞加热组POMCmRNA（1.4087±0.038626）较对照组（1.000）有统计学差异（P0.05）。 2.用ELISA法测黑素细胞及HaCaT细胞胞浆α-MSH蛋白的表达变化，结果显示黑素细胞加热组α-MSH（0.1636±0.00054）较对照组（0.1629±0.00040）有显著统计学差异（P0.05），HaCaT细胞加热组α-MSH蛋白（0.1655±0.00040）较对照组（0.1650±0.00047）有统计学差异（P0.05）。 3.建立黑素细胞和HaCaT细胞的共培养模型，分为5组。热处理前，向各组中分别加入α-MSH抗体0、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L。发现，加入α-MSH抗体后黑素含量较对照组（0.1958±0.1898），，分别为0.1915±0.01013、0.1565±0.00550、0.0870±0.00303、0.1693±0.01829；加入10-9mol/L组与对照组无统计学差异（P0.05），加入10-8和10-6mol/L组均较对照组有下降（P0.05），但组间无统计学差异（P0.05），加入10-7mol/L组黑素含量下降最显著（P0.001）。酪氨酸酶活性较对照组（0.2086±0.02011）相比，分别为0.1238±0.02034、0.0870±0.01454、0.0424±0.01036、0.0834±0.01126；其中加入10-7mol/L组酪氨酸酶活性最低（P0.001），加入10-8和10-6mol/L组间无显著统计学差异（P0.05），而加入10~(-9)mol/L组酪氨酸酶活性较对照组也是降低的（P0.05）。 结论 1.热处理（42℃,1h,3d）可显著增加黑素细胞和HaCaT细胞内POMCmRNA含量。 2.热处理（42℃,1h,3d）可显著增加黑素细胞和HaCaT细胞胞浆中α-MSH蛋白的含量。 3.加入α-MSH抗体后，热处理并不能提高共培养模型中黑素含量及酪氨酸酶活性；黑素含量和酪氨酸酶活性在10-7mmol/L时抑制作用最强。
【关键词】：热处理 黑素细胞 HaCaT细胞 POMC α-MSH 黑素含量 酪氨酸 酶活性
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R751
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 文献回顾15-24
• 1 材料24-26
• 1.1 研究对象24
• 1.2 主要仪器设备和试剂24-25
• 1.3 主要试剂配制25-26
• 2 方法26-32
• 2.1 人黑素细胞的原代培养26
• 2.2 黑素细胞的传代26-27
• 2.3 细胞的冻存及复苏27
• 2.4 HaCaT细胞培养方法27
• 2.5 实验分组与干预27-30
• 2.6 建立黑素细胞与HaCaT细胞共培养模型30-31
• 2.7 不同αMSH抗体浓度干预后共培养模型中黑素含量的测定31
• 2.8 不同αMSH抗体浓度干预后共培养模型中酪氨酸酶活性的测定31-32
• 2.9 统计学处理32
• 3 结果32-35
• 3.1 热处理黑素细胞及HaCaT细胞核内POMC合成的影响32
• 3.2 热处理黑素细胞及HaCaT细胞胞浆αMSH合成的影响32-33
• 3.3 加入αMSH抗体对共培养模型黑素含量的影响33
• 3.4 加入αMSH抗体对共培养模型酪氨酸酶活性的影响33-35
• 4 讨论35-40
• 小结40-41
• 参考文献41-46
• 个人简历和研究成果46-47
• 致谢47

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