GJB2基因突变在长岛型掌跖角化病发病中的作用

发布时间：2021-11-24 04:11

　　目的鉴定一家系长岛型掌跖角化症（NPPK）的突变位点,阐明NPPK的发病机制。方法将收集的2例NPPK病人外周血,提取DNA后对GJB2、GJB3、GJB4、GJB6、GJA1五个基因进行测序,鉴定突变位点;连接蛋白转录物显微注射卵母细胞,分别为:缝隙连接蛋白（Connexin,Cx）)26、Cx31、Cx26+Cx31、Cx26+Cx26-S183F、Cx31+Cx26-S183F及注射水的对照组,并通过膜片钳实验记录半通道电流;蛋白质印迹检测法检测NPPK突变体及野生型Cx31的表达水平;通过免疫共沉淀检测Cx26 NPPK突变体与Cx31的互作情况。结果测序发现Cx26（GJB2）基因发生了突变（c.548C>T）,第183位的丝氨酸被苯丙氨酸取代（p.Ser183Phe）导致了NPPK;当在卵母细胞单独表达Cx26-S183F时,不能形成间隙连接通道或半通道;突变体与野生型Cx31的共表达,显示Cx31间隙连接通道的反式显性抑制,而不降低Cx31蛋白质合成;免疫共沉淀表明,与野生型相比,突变体Cx26对Cx31蛋白更有效地下拉,说明增强了异型连接子的形成;在Cx26突变体... 

【文章来源】：安徽医药. 2020,24(01)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

检测各处理组（注入水、Cx26、Cx26-S183F、Cx26-S183F+Cx26）卵母细胞的间隙连接的电导率：A为检测野生型Cx26、Cx26突变体及Cx26-S183F+Cx26的电导率，B为检测野生型Cx31、Cx31+Cx26及Cx31+Cx26-S183F的电导率

用蛋白质印迹法检测野生型和突变体连接蛋白的表达。结果显示，注射Cx31、Cx31+Cx26、Cx31+Cx26-S183F的处理组中均检测到Cx31蛋白（31kDa）（图2A），灰度值分析表明各处理之间差异无统计学意义（P>0.05，图2B）。同理，在Cx26、Cx31+Cx26、Cx26-S183F、Cx26+Cx26-S183F及Cx31+Cx26-S183F处理组中均检测到Cx26(26kDa）（图2C），且表达量一致，定量分析显示各处理组之间差异无统计学意义（P>0.05，图2D）。说明Cx26-S183F突变体存在时功能活性的丧失与Cx31的翻译效率无关。2.4 Cx26突变体与Cx31的互相作用

KID综合征突变体单独存在时通常形成活跃的半通道[14-16]，而NPPK突变是否会出现类似的情况，为证实这一结果，在单个卵母细胞中表达Cx26和Cx26-S183F来分析半通道活性。结果显示，注射水的卵母细胞对照在所有电压阶段被限流（图4A),Cx26半通道活性在去极化时出现外向电流（图4B），与注射Cx26的细胞相比，Cx26-S183F的膜电流显著地降低（图4C）。以平均膜电流和膜电压作图，表达CX26的细胞出现较高的外向电流，并随着去极化的增加而增加，在+60mV时，Cx26产生的电流显著高于对照及Cx26-S183F突变体（P<0.05，图4D）。结果说明，注射突变体的细胞天然半通道活性丧失，Cx26-S183F与野生型Cx26的共表达导致半通道活性降低。图4 膜片钳实验检测长岛型掌跖角化症（NPPK）野生型Cx26和突变体的膜电流：A为检测注射水的对照组卵母细胞的电流，B为检测单独注射Cx26的卵母细胞的电流，C为检测单独注射Cx26突变体的卵母细胞的电流，D为半通道I-V曲线图


本文编号：3515210