中国弹力纤维假黄瘤临床病理特征与ABCC6基因新致病性突变的研究

发布时间：2017-05-09 17:05

  本文关键词：中国弹力纤维假黄瘤临床病理特征与ABCC6基因新致病性突变的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：弹力纤维假黄瘤(PXE)是缘于ABCC6基因突变导致的常染色体隐性遗传病，该病人群中的发病率还未有明确统计，据估计约为1:70000～1:100000。PXE临床上可累及皮肤、眼底及心血管等多个系统，早期皮肤损害为颈部及身体皱襞部位的黄色丘疹，逐渐融合成松弛性斑块。眼部受累多由于Bruch’s膜的钙化形成血管样条纹，可以导致视力受损，甚至视力丧失。心血管受损源于动脉血管的矿化作用，包括动脉粥样硬化、下肢间歇性跛行、高血压等，有时会引起早期心肌梗死。此外，弹力纤维假黄瘤还能引起胃肠道出血，由于异常矿化作用使钙质沉积在不同的器官，包括肝、肾、脾、乳房、睾丸等。弹力纤维假黄瘤皮肤表现是类似的，病情预后取决于眼底及心血管等系统的并发症。皮肤和眼底的受累常常发生于青春期，也可发生于更早的幼年时期，心血管并发症常常出现较晚，多发生于成年期。 ABCC6基因位置在16号染色体1区上，包括31个外显子，编码1503个氨基酸构成跨膜转运蛋白，称为多药耐药相关蛋白即MRP6。这种跨膜蛋白主要表达在肝脏上，肾脏和肠道也有一定水平的表达，，但PXE患者受累的皮肤、眼部及心血管系统则只能检测到很微量的表达。ABCC6基因的功能是作为一种有机阴离子输出泵，从肝脏到外周循环输送不确定的分子物质。近来研究通过建立敲除ABCC6基因的小鼠模型，已经证实PXE是一种代谢紊乱性疾病，但是从ABCC6基因突变到外周组织的矿化沉积具体的发病机制尚不清楚。超过90%的PXE患者被证实有ABCC6基因突变，截至目前已发现的ABCC6基因突变位点有800余个，包括第ABCC6基因翻译序列第1141位的一个无义突变和23-29区的大片缺失突变，这两个突变约占了所有发现突变的40%。 随着分子遗传学技术的迅速发展，外显子测序在医学研究领域的应用越来越广泛。大部分遗传性疾病的致病性突变集中于约1%的外显子区，这使得外显子测序成为研究孟德尔疾病即单基因遗传病的最简捷、最常用的方法。本研究我们收集来自国内9家医院的29例弹力纤维假黄瘤患者，分析其临床及病理特点，并通过外显子测序技术对其中22例样本合格的患者进行ABCC6基因突变位点检测，利用SIFT和PolyPhen-2致病软件预测突变的致病性，最终通过国际合作，利用小鼠模型和斑马鱼模型确定新发现的致病性突变。 目的 1.分析中国PXE患者的临床与组织病理学特点； 2.检测中国PXE患者ABCC6基因的突变位点，明确新的致病性突变。方法 1.回顾性调查29例PXE患者的临床资料，并对其皮肤组织病理切片、弹力纤维染色、钙染色等进行综合观察分析； 2.利用PCR方法，用正常人作对照，观察每例患者有无文献报告中常见的23-29区大片缺失的突变； 3.通过外显子测序分析总结出22例PXE患者ABCC6基因突变位点； 4.利用SIFT prediction和PolyPhen-2prediction两种软件预测所有发现突变位点的致病性； 5.利用小鼠模型，通过免疫荧光观察突变位点在小鼠肝细胞膜上或膜内的表达情 况，验证突变位点的致病性； 6.构建转基因斑马鱼，根据突变载体能否纠正ABCC6基因缺失突变的斑马鱼情况，进一步明确突变位点的致病性。 结果 1.29例PXE患者中，男女性别比例为1:8.7，平均发病年龄（22.6±11.2）岁；发病部位颈部占29例（100%），腋窝占11例（37.9%），腹部占5例（17.2%）、腹股沟占4例（13.8%）；所有患者HE染色都可发现真皮胶原卷曲样结构，弹力纤维染色可见到弹力纤维肿胀、断裂、卷曲、变性，钙染色可发现钙的沉积；5例患者做了眼底及心血管的检查，其中2例可见眼底血管条纹改变，较严重的1例发现眼底出血和视力受损，未发现心血管系统异常； 2.经PCR检测，所有患者均未发现23-29区大片缺失的突变； 3.新发现缺失或插入移码突变5个，即：C.4254delG，C.30delG，C.196-197inT，C.3586delC，C.196delT，这些突变造成氨基酸改变或编码终止，致病性明确； 4.利用SIFT prediction和PolyPhen-2prediction两种软件预测出两类突变位点：1）软件预测的明确致病突变位点：①C.1814TC（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/1）②C.373GA（SIFT：Damaging0.01，PolyPhen-2：probably/0.997）③C.11CA（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/0.957）④C.1256GA（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2： probably/0.994）⑤C.2843TC （SIFT： Damaging0， PolyPhen-2：probably/0.988）⑥C.2126AG（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/0.916）；2）软件预测的致病可能性大的突变位点：①C.2501TC（SIFT：Tolerated0.28，PolyPhen-2：Benign/0.047）②C.61CT（SIFT：Tolerated0.45，PolyPhen-2：benign/0.209）③C.191GA（SIFT：Tolerated0.21，PolyPhen-2：benign/0.051④C.26CA（SIFT：Damaging0.02，PolyPhen-2：benign/0.109）； 5.通过小鼠模型，把上述软件预测出的突变位点，通过免疫荧光观察其表达位置：全部在小鼠肝细胞膜膜内表达的突变位点：C.1814TC（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/1）；大部分在小鼠肝细胞膜膜内表达的突变位点：C.1256GA（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/0.994）；其余突变位点在小鼠肝细胞膜上有较多表达，致病可能性还有待进一步验证及综合分析； 6.通过构建转基因斑马鱼，发现突变载体不能纠正ABCC6基因缺失的突变位点：①C.11CA（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/0.957）②C.1256GA（SIFT：Damaging0， PolyPhen-2： probably/0.994）③C.26CA （SIFT： Damaging0.02，PolyPhen-2： benign/0.109）④C.2843TC （SIFT： Damaging0， PolyPhen-2：probably/0.988）⑤C.2126AG（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/0.916）⑥C.373GA（SIFT：Damaging0.01，PolyPhen-2：probably/0.997）⑦C.61CT（SIFT：Tolerated0.45，PolyPhen-2：benign/0.209）⑧C.2501TC（SIFT：Tolerated0.28，PoluPhen-2：Benign/0.047）；突变载体能够部分纠正ABCC6基因缺失的突变位点：C.191GA（SIFT：Tolerated0.21，PolyPhen-2：benign/0.051）。 结论 1.收集的PXE患者以女性居多，发病年龄小，颈部、腋窝为最常见的发病部位；通过皮肤组织病理学检查一般能及时做出诊断；对患者眼底和心血管系统并发症检查和积极地随访十分必要和重要； 2.欧美人群PXE患者常见的23-29区大片缺失的突变在我们所收集的样本中均没有被发现，23-29区大片缺失的突变可能不是中国汉族PXE患者的常见致病突变； 3.新发现5个中国汉族PXE患者ABCC6基因缺失或插入致病突变位点：C.4254delG，C.30delG，C.196＿197inT，C.3586delC，C.196delT； 4.利用动物模型鉴定出9个中国汉族PXE患者ABCC6基因新的致病错义突变位点：C.1814TC，C.11CA，C.1256GA，C.26CA，C.2843TC，C.2126AG，C.373GAC.61CT，C.2501TC。
【关键词】：弹力纤维假黄瘤 临床表现 病理特征 ABCC6基因 突变 外显子
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R758.5
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 中文摘要6-10
• Abstract10-15
• 前言15-16
• 文献回顾16-24
• 第一部分 中国弹力纤维假黄瘤临床病理特征24-32
• 1 病例的收集与数据统计24-25
• 2 结果25-28
• 3 讨论28-31
• 小结一31-32
• 第二部分 中国汉族 PXE 患者 ABCC6 基因新致病突变的研究32-57
• 1 实验材料与仪器32-34
• 2 方法34-45
• 3 结果45-52
• 4 讨论52-55
• 小结二55-57
• 参考文献57-63
• 个人简历和研究成果63-64
• 致谢64-65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 杨梅;;弹性纤维假黄瘤研究进展[J];铜陵职业技术学院学报;2009年04期

2 杨梅;高敏;肖风丽;周伏圣;方巧云;杜文辉;杨森;张学军;;弹性纤维假黄瘤ABCC6基因突变检测[J];安徽医科大学学报;2008年02期

  本文关键词：中国弹力纤维假黄瘤临床病理特征与ABCC6基因新致病性突变的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：352898