小分子化合物I942对PIG1黑素细胞黑素合成功能的影响及机制研究
发布时间：2022-01-01 23:52
研究背景及目的:白癜风是由表皮黑素细胞减少或功能障碍引起的获得性皮肤色素脱失症,全球范围内的发病率为0.5%～1%,是引起皮肤色素脱失最常见的原因之一。白癜风的发病机制目前尚不清楚,主要包括遗传因素、自身免疫、神经精神因素、微量元素缺乏等。作为损容性皮肤病的一种,白癜风常伴发抑郁、焦虑等心理问题及社会适应不良,严重影响患者生活质量。目前白癜风的治疗主要以外用糖皮质激素及紫外线光疗为主,对于一些药物抵抗的白癜风类型,治疗仍比较棘手。促进皮损处残存的黑素细胞合成黑素或补充正常黑素细胞是治疗白癜风的重要策略。黑素合成是酪氨酸在黑素细胞的黑素小体内经历一系列化学反应生成黑素多聚物,转运至周围角质形成细胞核表面,从而抵御细胞内部及外界刺激的过程,是皮肤光保护和诸多色素性皮肤病发生的关键环节。黑素合成主要受到来自体内外多种因素的调节,其中外部因素主要为紫外线等,内部因素来自黑素细胞自身（包括酪氨酸酶及酪氨酸酶相关蛋白等）、周围细胞（主要是角质形成细胞）、内分泌、神经及免疫方面。调节黑素合成的信号通路包括c AMP/PKA（Cyclic Adenosine Monophosphate/Protein...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
黑素合成大致过程
小分子化合物I942对PIG1黑素细胞黑素合成功能的影响及机制研究-13-至周围的角质形成细胞，呈帽状沉积在角质形成细胞核表面，完成皮肤的色素沉着以保护细胞免受紫外线等有害因素的损伤[11]。同时，黑素细胞的生物学功能又反过来受到周围细胞各种分泌因子的调节，这些来自角质形成细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等分泌的调节因子一同形成了黑素合成的旁分泌调节网络[12]。角质形成细胞是最为直接的调节成分，可通过分泌α-黑素细胞刺激素（α-Melanocytestimulatefactor,α-MSH）、干细胞生长因子（Stemcellfactor,SCF）、转化生长因子β（Transforminggrowthfactorβ,TGF-β）等调节黑素合成[13]。EPAC下游的Rap蛋白参与了调节角质形成细胞炎症因子分泌的磷脂酶C通路[14]，近期的研究表明I942可通过EPAC1通路调节人脐带血管内皮细胞中多种炎症因子基因的表达而参与炎症反应[15]，我们前期的研究表明，I942还可促进角质形成细胞角蛋白19的分泌及角质形成细胞的迁移，我们猜想I942可能通过EPAC改变角质形成细胞炎症因子等分泌，进一步影响黑素细胞的黑素合成。本课题中，我们拟对小分子化合物I942对PIG1黑素细胞黑素合成的影响及相关分子机制进行研究。并使用小分子化合物I942处理HaCaT细胞，再通过HaCaT细胞培养液离心后的上层清夜培养PIG1黑素细胞的形式，研究I942通过角质形成细胞对PIG1黑素细胞黑素合成功能的影响及相关的分子机制。从而探索小分子化合物I942用于白癜风药物治疗及改进现有黑素细胞体外培养技术的可能性。图2小分子化合物I942化学结构式及化学性质Fig.2ConstitutionandpropertiesofsmallmolecularcompoundI942
小分子化合物I942对PIG1黑素细胞黑素合成功能的影响及机制研究-19-凋亡试验，（3）CCK8法检测细胞活力，从培养箱中取出待测孔板，无菌条件下向每孔加入19μlCCK-8试剂，继续放入培养箱中培养，约3~4h后，放入酶联免疫检测仪检测各孔在波长为450nm处的光密度（OD）值。（三）统计学处理使用SPSS22.0软件对CCK8试验结果进行统计学分析，所获取的数据表示为均数±标准差（x±s）。不同分组之间比较使用单因素方差分析，所有实验至少重复3次，P<0.05为具有统计学意义。四、实验结果（四）PIG1黑素细胞培养及鉴定采用多巴染色法对黑素细胞系PIG1进行鉴定（见图1.1），正常培养条件下处于对数生长期的PIG1黑素细胞中（图1.1A），可见黑素细胞呈梭形或多角形贴壁生长，该视野中大部分细胞呈梭形，少数细胞呈多角形，多数细胞具有2~3个树突，少数具有3个及多个树突，胞质内部隐约可见浅棕色色素颗粒。将相同条件下的PIG1黑素细胞使用0.1%的多巴溶液进行染色后（见图1.1B），大约30min时，PIG1黑素细胞颜色开始逐渐变深，3~4h被完全染成棕黑色，图示为多巴染色2h后的PIG1黑素细胞，可见大部分细胞呈现棕色，少数细胞呈深棕色及黑色。AB图1.1PIG1黑素细胞的鉴定结果（20×）Fig1.1IdentificationofPIG1melanocytes（20×）.
【参考文献】：
硕士论文
[1]江西地区儿童白癜风及成人白癜风的临床特征分析[D]. 万辰.南昌大学 2018
本文编号：3563064
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
黑素合成大致过程
小分子化合物I942对PIG1黑素细胞黑素合成功能的影响及机制研究-13-至周围的角质形成细胞，呈帽状沉积在角质形成细胞核表面，完成皮肤的色素沉着以保护细胞免受紫外线等有害因素的损伤[11]。同时，黑素细胞的生物学功能又反过来受到周围细胞各种分泌因子的调节，这些来自角质形成细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等分泌的调节因子一同形成了黑素合成的旁分泌调节网络[12]。角质形成细胞是最为直接的调节成分，可通过分泌α-黑素细胞刺激素（α-Melanocytestimulatefactor,α-MSH）、干细胞生长因子（Stemcellfactor,SCF）、转化生长因子β（Transforminggrowthfactorβ,TGF-β）等调节黑素合成[13]。EPAC下游的Rap蛋白参与了调节角质形成细胞炎症因子分泌的磷脂酶C通路[14]，近期的研究表明I942可通过EPAC1通路调节人脐带血管内皮细胞中多种炎症因子基因的表达而参与炎症反应[15]，我们前期的研究表明，I942还可促进角质形成细胞角蛋白19的分泌及角质形成细胞的迁移，我们猜想I942可能通过EPAC改变角质形成细胞炎症因子等分泌，进一步影响黑素细胞的黑素合成。本课题中，我们拟对小分子化合物I942对PIG1黑素细胞黑素合成的影响及相关分子机制进行研究。并使用小分子化合物I942处理HaCaT细胞，再通过HaCaT细胞培养液离心后的上层清夜培养PIG1黑素细胞的形式，研究I942通过角质形成细胞对PIG1黑素细胞黑素合成功能的影响及相关的分子机制。从而探索小分子化合物I942用于白癜风药物治疗及改进现有黑素细胞体外培养技术的可能性。图2小分子化合物I942化学结构式及化学性质Fig.2ConstitutionandpropertiesofsmallmolecularcompoundI942
小分子化合物I942对PIG1黑素细胞黑素合成功能的影响及机制研究-19-凋亡试验，（3）CCK8法检测细胞活力，从培养箱中取出待测孔板，无菌条件下向每孔加入19μlCCK-8试剂，继续放入培养箱中培养，约3~4h后，放入酶联免疫检测仪检测各孔在波长为450nm处的光密度（OD）值。（三）统计学处理使用SPSS22.0软件对CCK8试验结果进行统计学分析，所获取的数据表示为均数±标准差（x±s）。不同分组之间比较使用单因素方差分析，所有实验至少重复3次，P<0.05为具有统计学意义。四、实验结果（四）PIG1黑素细胞培养及鉴定采用多巴染色法对黑素细胞系PIG1进行鉴定（见图1.1），正常培养条件下处于对数生长期的PIG1黑素细胞中（图1.1A），可见黑素细胞呈梭形或多角形贴壁生长，该视野中大部分细胞呈梭形，少数细胞呈多角形，多数细胞具有2~3个树突，少数具有3个及多个树突，胞质内部隐约可见浅棕色色素颗粒。将相同条件下的PIG1黑素细胞使用0.1%的多巴溶液进行染色后（见图1.1B），大约30min时，PIG1黑素细胞颜色开始逐渐变深，3~4h被完全染成棕黑色，图示为多巴染色2h后的PIG1黑素细胞，可见大部分细胞呈现棕色，少数细胞呈深棕色及黑色。AB图1.1PIG1黑素细胞的鉴定结果（20×）Fig1.1IdentificationofPIG1melanocytes（20×）.
【参考文献】：
硕士论文
[1]江西地区儿童白癜风及成人白癜风的临床特征分析[D]. 万辰.南昌大学 2018
本文编号：3563064
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/pifb/3563064.html
最近更新
教材专著
