4-DAMP抑制A375黑色素瘤增殖作用及机制研究

发布时间：2022-07-03 17:43

　　目的:研究毒蕈碱型M₃受体拮抗剂（4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide,4-DAMP）对黑色素瘤增殖的抑制作用,从而探讨M₃受体拮抗剂在抗肿瘤领域的发展前景及意义。方法:利用MTT [3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide]检测肿瘤细胞活力;EdU荧光染色观察细胞增殖情况。成年雄性BALB/c裸小鼠分为对照组、5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil, 5-Fu）组(20 mg·kg^-1·d^-1)及4-DAMP组(2 mg·kg^-1·d^-1),建立荷瘤模型。连续给药21 d后处死小鼠,计算抑制率、脾指数。实时定量PCR （quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction, qRT-PCR）检测A375细胞系中M3R、MIA（melano... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 肿瘤细胞培养
    1.3 肿瘤细胞模型的建立与分组
    1.4 MTT比色法
    1.5 EdU细胞增殖检测
    1.6 实验动物的分组与饲养
    1.7 小鼠肿瘤模型建立及一般检测
    1.8 肿瘤组织H&E染色
    1.9 RNA敲减及转染
    1.10 qRT-PCR
    1.11 Western Blot
    1.12 统计学处理
2 结果
    2.1 MTT筛选药物浓度
    2.2 4-DAMP抑制黑色素瘤增殖的作用
    2.3 EdU检测细胞增殖
    2.4 黑色素瘤的形态及病理学分析
    2.5 4-DAMP对瘤质量、抑制率、脾指数的影响
    2.6 小鼠的体重变化曲线
    2.7 4-DAMP对肿瘤质量及体积的影响
    2.8 A375黑色素瘤细胞系中MIA、SP-1及Lnc-SPRY4-IT1的表达
        2.8.1 拮抗M3受体对MIA的基因表达影响
        2.8.2 拮抗M3受体对SP-1的基因表达影响
        2.8.3 拮抗M3受体对LncSPRY4-IT1的基因表达影响
    2.9 拮抗M3受体对t-ERK/p-ERK的表达影响
3 讨论



本文编号：3655352