改良的Trizol法提取小鼠皮肤RNA技术

发布时间：2022-07-15 11:27

　　【目的】由于皮肤组织韧性强且存在大量RNA酶,采用经典Trizol法提取的RNA存在易降解质量低等不足。因此,本研究旨在通过改良的Trizol法实现高质量的皮肤RNA提取。【方法】采用不同处理方式（Tri:Trizol包埋;Pro:RNA样本保护液包埋;Cry:先冷冻液氮再冷冻-80℃冰箱;LNG:液氮研磨;Cut:采用剪刀剪碎组织）提取的小鼠正常皮肤RNA为实验组;脊髓组织作为参照组,并以咪喹莫特（IMQ）诱导的小鼠银屑病模型皮肤组织作为保真性验证组。我们采用紫外分光光度法、琼脂凝胶电泳法、定量逆转录PCR法（qRT-PCR）等方法来检测经典Trizol法（1-Tri,Nor）和改良Trizol法（2-Tri,LNG-Tri,Tri-Cut,Pro）提取的RNA浓度、纯度和完整性以及IL-1βmRNA表达的差异性情况。【结果】①与脊髓组织相比,经典Trizol法（1-Tri）获得的正常皮肤组织总RNA量要低,DNA污染和5S RNA条带明显,IL-1βmRNA相对表达偏高,说明经典Trizol法在皮肤组织中提取RNA存在局限性,需要进行改良。②在不同小鼠皮肤样本处理组中,改良的2-T... 

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

LNG-Tri或2-Tri法改良皮肤总RNA提取的流程方案

不同样品处理后RNA的琼脂凝胶电泳样图及分析

不同样品处理后正常皮肤和银屑病变皮肤中IL-1βmRNA表达的差异

【参考文献】：
期刊论文
[1]脊髓白细胞介素-10/β-内啡肽通路抑制幼年大鼠神经病理性疼痛[J]. 唐雪琪,卢金淼,毛晓芳,王永祥.  中山大学学报(医学版). 2019(03)
[2]Trizol法提取新生小鼠脑组织总RNA优化比较[J]. 杨智,程春凤,黄昕艳,刘爽,尹兴忠,李艳丽,王坤,朱晓峰.  中风与神经疾病杂志. 2012(02)



本文编号：3661960