金环蛇抗菌肽Cath-BF在毕赤酵母中的组成型分泌表达

发布时间：2022-08-02 16:14

　　痤疮是一种常见的毛囊皮脂腺炎症性皮肤病,主要由厌氧性座疮丙酸杆菌所致,目前主要采用抗生素治疗,但疗效不理想,并且可导致抗性菌的产生和超敏反应。新近从金环蛇蛇毒中分离的抗菌肽Cath-BF属于第一个被报道的脊椎动物来源抗菌肽,该抗菌肽可在小鼠模型中有效抑制痤疮丙酸杆菌及其它痤疮感染菌的生长,并抑制相关炎性增生,因此在痤疮防治中具有重要的应用价值。天然分离的Cath-BF为30个氨基酸残基组成的多肽,而根据其c DNA编码产物推断的该抗菌肽在N端应该还有4个氨基酸残基,即天然长度应该为34个氨基酸残基,,但目前尚未有实验证明该结构形式的抗菌肽是否存在及有无抑菌活性。蛇毒来源有限,从中制备抗菌肽得率低,成本高,化学合成抗菌肽同样存在成本高的问题,因此,采用基因工程手段建立高效生产方法对于Cath-BF的推广应用具有现实意义。毕赤酵母（Pichia pastoris）系统是最成熟的外源基因高效表达系统,遗传背景清楚、可高密度发酵,因而具有良好的工业化性能。其组成型表达系统是基于磷酸甘油醛脱氢酶的强启动子p GAP,无需像AOX1启动子那样采用甲醇诱导,用于人用产品的生产更安全。另外,Cath-... 

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1 前言
    2 抗菌肽的研究进展
    3 蛇毒抗菌肽的研究进展
    4 蛇毒抗菌肽表达系统的选择
    5 本课题的研究基础与内容
第二章 金环蛇抗菌肽Cath-BF30 与Cath-BF34 表达载体的构建
    1 前言
    2 实验材料
        2.1 菌种和质粒
        2.2 主要试剂
        2.3 主要仪器设备
    3 实验方法
        3.1 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 与Cath-BF34 目的基因的设计与合成
        3.2 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 与Cath-BF34 克隆载体的构建
        3.3 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 与Cath-BF34 重组酵母菌的构建
    4 结果
        4.1 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 与Cath-BF34 基因设计
        4.2 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 与Cath-BF34 基因合成与克隆鉴定
        4.3 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 与Cath-BF34 表达载体的构建
        4.4 蛇毒抗菌肽Cath-BF毕赤酵母转化子筛选与鉴定
    5 讨论
    6 小结
第三章 金环蛇抗菌肽工程菌表达产物活性鉴定、发酵与纯化
    1 前言
    2 实验材料
        2.1 菌种和质粒
        2.2 主要试剂
        2.3 主要培养基
    3 实验方法
        3.1 抗菌肽粗样品的获得
        3.2 透明斑法鉴定抗菌肽粗样品活性
        3.3 96孔板再次鉴定抗菌肽粗产品活性
        3.4 pH值对目的基因表达影响观察
        3.5 蛇毒抗菌肽工程菌的发酵
        3.6 SP强阳离子纯化蛇毒抗菌肽
    4 结果
        4.1 透明斑法鉴定抗菌肽粗品活性
        4.2 96 孔板鉴定抗菌肽粗品活性
        4.3 培养基pH值对Cath-BF分泌表达产物的影响
        4.4 SMD-Cath-BF大规模发酵
        4.5 Cath-BF表达产物分离纯化
    5 讨论
    6 结论
第四章 结论
参考文献
附录
    附录1 文献综述
        参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Crude extract of maggots:Antibacterial effects against Escherichia coli,underlying mechanisms,separation and purification[J]. Quan-Sheng Ge,Hui-Min Zhang,Xia Liu,Shou-Yu Wang,De-Cheng Lv,Xu-Dong Li.  World Journal of Gastroenterology. 2015(05)
[2]一种新型高效生物可降解ε-多聚赖氨酸修饰阳离子聚合物抗菌剂的合成与性能（英文）[J]. 赵瑞芳,王海,季天骄,Greg Anderson,聂广军,赵宇亮.  Science Bulletin. 2015(02)
[3]抗菌肽LL-37与胃肠道疾病的研究进展[J]. 郭方方,房静远.  世界华人消化杂志. 2014(35)
[4]抗菌肽在生猪养殖中的应用[J]. 李君荣,申婷,雷晓盼.  安徽农学通报. 2014(23)
[5]抗菌肽与细胞膜相互作用机制的分子动力学模拟研究[J]. 彭冉,毛文超,赵立岭,曹赞霞,王吉华.  德州学院学报. 2014(06)
[6]条斑紫菜蛋白酶解产物中抗菌肽的纯化及特征[J]. 刘冬冬,周锋,周楠迪,田亚平.  天然产物研究与开发. 2014(12)
[7]生猪生产中抗生素一些替代品的研究进展[J]. 张万明,陶璇,顾以韧,杨雪梅,梁艳,吕学斌.  养猪. 2014(06)
[8]Characterization of a Bacteriocin-Like Substance Produced from a Novel Isolated Strain of Bacillus subtilis SLYY-3[J]. LI Junfeng,LI Hongfang,ZHANG Yuanyuan,DUAN Xiaohui,LIU Jie.  Journal of Ocean University of China. 2014(06)
[9]Self-assembly of surfactant-like peptides and their applications[J]. ZHANG Jing Hui,ZHAO Yu Rong,HAN Shu Yi,CHEN Cui Xia,XU Hai.  Science China（Chemistry）. 2014(12)
[10]抗菌肽促进创伤愈合研究进展[J]. 蒋艳,王仙园.  重庆医学. 2014(33)

博士论文
[1]抗HCV/HIV多肽的结构与活性研究及多肽的抗癌作用机理研究[D]. 李桂荣.吉林大学 2014
[2]五种抗菌肽的设计、原核表达和抗菌作用机理研究[D]. 衣同辉.吉林大学 2014
[3]基于肽—膜相互作用的模拟细胞膜法筛选抗菌肽的研究[D]. 唐文婷.江南大学 2014
[4]乳酸菌的分离鉴定及其抗菌肽与发酵性能研究[D]. 华鹤良.扬州大学 2014

硕士论文
[1]产ClassⅡa类抗菌肽乳酸菌的筛选及其抗菌特性研究[D]. 侯亚文.哈尔滨工业大学 2013



本文编号：3668838