重编程的CRISPR-Cas9对HPV6/11 E7基因转化细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

发布时间：2022-09-29 12:45

　　研究背景人乳头状瘤病毒（HPVs）是可引起性传播疾病的一类非常重要的人类传染病病原体。最常见的HPV高危亚型16和18型可以在宫颈癌和阴茎癌的组织样本中被大量检测到。而HPV低危亚型6和11型则与肛门生殖器疣和喉乳头状瘤的发生发展息息相关。HPV低危亚型（6和11）的持续性感染是引发尖锐湿疣的主要原因。尖锐湿疣的传统治疗手段包括三氯乙酸治疗,冷冻治疗和手术切除等。虽然治疗这种疾病的手段和方式众多,病灶成功清除后的疾病复发率却一直非常的高。将传统治疗手段与新型小分子靶向治疗药物相结合,或许可以进一步改善尖锐湿疣疾病治疗的预后,降低其术后复发率。HPV感染所引起的皮肤相关性病损一般是持续性表达致癌性E7蛋白的结果,E7蛋白在细胞核和细胞浆中均有作用靶标并且可以促进已分化的人角质形成细胞提前进入细胞周期的S期。靶向E7基因的小分子抑制剂可以用来改善传统手段治疗HPV相关性性病的整体效果。这些小分子靶向制剂通常包括反义脱氧寡核苷酸、核酶以及小干扰RNA（si RNA）。但是由于HPV6/11 E7m RNA大多数序列位点的可及性较低,这些方法往往只能取得部分成功。因此,目前基于新一代小分子制剂... 

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

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1. 引言
    1.1 研究背景
    1.2 本课题的研究思路
2. 实验材料和方法
    2.1 实验对象
    2.2 研究所用试剂
    2.3 研究所用仪器与耗材
    2.4 研究使用生物网站和分析软件
    2.5 实验方法
3. 结果
    3.1 HPV6 E7基因合成与表达载体构建
    3.2 HPV11 E7基因合成与表达载体构建
    3.3 CRISPR-Cas9表达载体构建
    3.4 HPV 6/11 E7基因表达对人包皮角质形成细胞生长的影响
    3.5 重编程的CRISPR-Cas9系统对HPV6 E7和HPV11 E7蛋白表达的影响
    3.6 重编程的CRISPR-Cas9系统对角质形成细胞异常增殖的影响
    3.7 重编程的CRISPR-Cas9系统对角质形成细胞凋亡的影响
4. 讨论
    4.1 概论
    4.2 HPVE7基因的致病作用讨论
    4.3 CRISPR-Cas9对HPV E7基因的失活作用和机制讨论..70
    4.4 针对HPV相关基因的CRISPR-Cas9系统的改进计划和研究前景展望
5. 结论
6. 参考文献
附录
读博期间发表论文
致谢
课题综述 CRISPR-Cas9技术在治疗人类疾病中的应用
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]应用SSA报告载体提高ZFN和CRISPR/Cas9对猪IGF2基因的打靶效率[J]. 吴金青,梅瑰,刘志国,陈瑶生,丛佩清,何祖勇.  遗传. 2015(01)



本文编号：3682616