灵芝多糖拮抗B16F10肿瘤上清对同基因小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的抑制作用

发布时间：2017-05-18 08:11

  本文关键词：灵芝多糖拮抗B16F10肿瘤上清对同基因小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的抑制作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 黑素瘤是一种恶性程度极高的皮肤肿瘤,其发生与机体的免疫功能异常关系密切,而细胞因子在机体的免疫功能中的作用日益引起重视。IL-2、IFN-γ、TNF-α都具有广泛的生物学活性,是机体细胞因子网络中的重要成员,参与机体的免疫调节,在机体抗病毒,抗肿瘤免疫中起着重要的作用。灵芝多糖(Ganoderma lucidum Polysaccharides Gl-PS)是灵芝的主要活性成分之一,具有多种药理作用。目前关于灵芝多糖抗肿瘤机制的研究已有很多文献资料报道,但其是否能够拮抗B16F10肿瘤上清对同基因小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的抑制作用,还有待直接证据加以确认。本实验依据培养小鼠淋巴细胞的B16F10肿瘤上清中所含灵芝多糖浓度不同进行分组,并以RPMI1640完全培养基为对照组,探讨灵芝多糖拮抗B16F10肿瘤上清对同基因小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γTNF-α的抑制作用。 方法： 1.细胞来源：本实验采用的B16F10细胞是一种来源于C57BL/6j小鼠的高转移性黑素瘤细胞系。 2.实验分组及干预：实验依据培养小鼠淋巴细胞的B16F10肿瘤上清中所含灵芝多糖浓度不同进行分组,设0μg/ml、0.2μg/ml、0.8μg/ml、3.2μg/ml、12.8μg/ml五个实验组,并以RPMI1640完全培养基为对照组。 3.采用免疫细胞化学染色方法,检测各组细胞IL-2、IFN-γ、TNF-α蛋白的表达情况。 4.采用蛋白印迹(Western-blot)技术,检测各组细胞IL-2、IFN-γ、TNF-α在蛋白水平的表达差异。 5.采用RT-PCR技术,检测各组细胞IL-2、IFN-γ、TNF-α在基因转录水平的表达差异。 6.数据统计分析：应用SPSS17.0统计学软件,对结果进行单因素方差分析,P0.05表示差异有统计学意义。 结果： 1.灵芝多糖拮抗B16F10肿瘤上清对同基因小鼠淋巴细胞分泌IL-2的抑制作用：用免疫细胞化学染色检测工L-2阳性程度,肿瘤上清组远低于RPMI1640培养基对照组,随着灵芝多糖浓度的增加,IL-2的阳性信号逐渐升高；应用蛋白印迹(Western-blot)技术检测,肿瘤上清组工L-2的表达量明显低于RPMI1640培养基对照组(P0.05),且随灵芝多糖浓度的增高而逐渐升高,呈现一定的剂量依赖关系,经方差分析差异有显著性(F=10.326,P0.01)。各灵芝多糖组分别与0u g/ml组比较差异均有显著性(P0.05)；RT-PCR技术检测显示,IL-2mRNA的表达水平肿瘤上清组明显低于RPMI1640培养基对照组(P0.05),随灵芝多糖浓度的增高,IL-2mRNA表达水平逐渐升高,呈现一定的剂量依赖关系。经方差分析,差异有显著性(F=13.675,P0.01)。各灵芝多糖组分别与0u g/ml组比较除0.2μg/ml组外差异均有显著性(P0.05) 2.灵芝多糖对B16F10肿瘤上清抑制同基因小鼠淋巴细胞分泌IFN-γ的拮抗作用：免疫细胞化学染色检测显示,IFN-γ阳性程度,肿瘤上清组远低于RPMI1640培养基对照组,随着肿瘤上清中灵芝多糖浓度的增加,阳性信号逐渐升高；蛋白印迹(Western-blot)检测显示,肿瘤上清组IFN-γ的表达明显低于RPMI1640培养基对照组(P0.05),随灵芝多糖浓度的增高,IFN-γ表达量逐渐升高,呈现一定的剂量依赖关系,经方差分析,差异有显著性(F=5.171,P0.01),各灵芝多糖组分别与0μg/ml组比较,12.8μ g/ml组差异有显著性(P0.05)；RT-PCR技术检测显示,IFN-γ mRNA的表达水平肿瘤上清组明显低于RPMI1640培养基对照组(P0.05),随灵芝多糖浓度的增高,IFN-γ mRNA逐渐升高,呈现一定的剂量依赖关系,经方差分析,差异有显著性(F=13.240,P0.01)。各灵芝多糖组分别与0μg/ml组比较,除0.2μg/ml组外差异均有显著性(P0.05)。 3.灵芝多糖对B16F10肿瘤上清抑制同基因小鼠淋巴细胞分泌TNF-α的拮抗作用：免疫细胞化学染色显示,TNF-α日性程度,肿瘤上清组远低于RPMI1640培养基对照组,随着灵芝多糖浓度的增加,TNF-α的阳性程度逐渐升高；应用蛋白印迹(Western-blot)技术检测,肿瘤上清组TNF-α的表达明显低于RPMI1640培养基对照组(P0.05),随灵芝多糖浓度的增高,TNF-α表达量逐渐升高,呈现一定的剂量依赖关系,经方差分析,差异有显著性(F=5.143,P0.01),各灵芝多糖组分别与0μg/ml组比较,除0.2μg/ml、0.8μg/ml组差异均有显著性(P0.05)；RT-PCR技术检测显示,TNF-α mRNA的表达水平肿瘤上清组明显低于RPMI1640培养基对照组(P0.05),随灵芝多糖浓度的增高,TNF-α mRNA逐渐升高,呈现一定的剂量依赖关系,经方差分析,差异有显著性(F=8.143,P0.01)。各灵芝多糖组分别与0μg/ml组比较,除0.8μg/ml组外差异均有显著性(P0.05)。 结论： 1.B16F10黑素瘤细胞培养上清可抑制小鼠淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α。 2.灵芝多糖可拮抗B16F10肿瘤上清对同基因小鼠淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的抑制作用。
【关键词】：灵芝多糖 拮抗 黑素瘤 工L-2 IFN-γ TNF-α
【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 英文缩写13-14
• 前言14-16
• 材料与方法16-31
• 结果31-34
• 附图34-47
• 附表47-48
• 讨论48-52
• 结论52-53
• 参考文献53-57
• 综述57-65
• 参考文献62-65
• 致谢65-66
• 个人简历66

【参考文献】

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本文编号：375513