金黄色葡萄球菌对人角质形成细胞Toll样受体2及β-防御素-3影响的研究

发布时间：2023-03-12 17:00

　　目的:目前国内对金黄色葡萄球菌(金葡菌)侵染人角质形成细胞的研究多集中在抗菌肽对金葡菌的抑制与杀伤作用等方面,而对染菌角质形成细胞产生的Toll样受体与β-防御素的相关研究较少。本实验通过建立金葡菌侵染人角质形成细胞(HaCaT细胞)的体外模型,来观察金葡菌对HaCaT细胞活力的影响,检测染菌细胞内Toll样受体2(TLR2)和β-防御素-3(hBD-3)的表达变化,初步探讨TLR2及hBD-3的免疫机制,来揭示皮肤感染金葡菌后的发病机制。方法:将HaCaT细胞培养到80%融合时,用0.25%胰酶消化,加入培养液重悬,细胞计数,调整细胞浓度为0.5×10⁴/ml进行接种;将金葡菌接种于平板,培养24h,拍照观察其生长状况,挑取单菌落接种于液体培养基,16¹8h后收集菌体用培养基重悬,于分光光度计660nm处测定菌液OD值,算出菌液浓度(0.8004×10⁹CFU/ml)。实验设空白对照组和MOI(感染复数=细菌量∶细胞量)分别为1∶20、1∶10、1∶1、3∶1、10∶1、20∶1、50∶1、100∶1和200∶1的九个...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
引言
材料与方法
    1.主要材料及试剂
        1.1 主要仪器
        1.2 主要试剂
        1.3 常用溶液配置
    2.方法
        2.1 HaCaT细胞培养
        2.2 金黄色葡萄球菌培养
        2.3 最适菌种浓度筛选
        2.4 金黄色葡萄球菌对角质形成细胞中TLR2和hBD-3mRNA表达的影响
            2.4.1 实验分组与处理
            2.4.2 RT-PCR检测
                2.4.2.1 总RNA的提取
                2.4.2.2 RNA纯度及浓度检测
                2.4.2.3 RT-PCR检测
                2.4.2.4 琼脂糖凝胶电泳
            2.4.3 图像及统计学分析
结果
    1.CCK8检测结果
    2.图像及统计学分析结果
        2.1 图像分析结果
        2.2 统计学分析结果
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表(附录)
致谢



本文编号：3761602