靶向Pim-3的双功能载体对小鼠黑色素瘤的治疗作用及机制研究

发布时间：2023-03-30 20:19

　　目的黑色素瘤因其恶性程度极高而成为皮肤恶性肿瘤致死的主要原因之一,高发的侵袭和转移是其最为显著的特征和影响患者生存的首要因素。黑色素瘤的发病主要与紫外线的过度照射、环境因素、遗传因素、外界刺激等因素相关,目前治疗的主要方式包括手术、化疗、放疗和药物治疗,但预后较差,复发率高,病死率高。肿瘤细胞的无限生长和机体抗肿瘤免疫应答之间的相互作用是影响肿瘤发生发展的主要原因,为了有效激活机体抗肿瘤免疫应答,肿瘤免疫治疗得到了广泛的关注和迅速发展。研究发现,黑色素瘤免疫原性高,通过对其进行免疫治疗,增强机体抗肿瘤免疫应答,能有效的抑制肿瘤的生长,这也使得黑色素瘤的免疫治疗得到迅速的发展。Pim-3作为一种丝/苏氨酸蛋白激酶,在多种癌症中异常表达增加,主要通过磷酸化特异性底物使其失去活性,导致细胞凋亡减少、增殖增多,最终调控肿瘤的发生发展,因此Pim-3可能成为抗肿瘤治疗的一个新靶点。基于以上背景,我们尝试一方面利用具有免疫刺激作用的单链RNA(ssRNA)序列激活机体TLR-7受体,进而诱导细胞因子的产生,活化免疫效应细胞,最终刺激机体抗肿瘤免疫应答,引起机体免疫系统对癌细胞的自主杀伤及清除;另一...

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号说明
文献综述 基于免疫刺激和基因沉默的双功能靶向肿瘤基因免疫治疗
    1. 肿瘤生长及肿瘤微环境的特点
    2. 兼具靶基因沉默和免疫刺激作用的双功能免疫治疗
    3. 双功能免疫治疗中抑制肿瘤生长的靶点
    4. 刺激或唤起抗肿瘤免疫应答的策略
    5. 双功能免疫疗法的应用
    参考文献
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要实验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 细胞培养基
        2.1.3 STAT3激动剂和抑制剂
        2.1.4 实验动物与试剂
        2.1.5 流式细胞仪检测细胞表面分子所用的荧光标记抗体如表1所示
        2.1.6 动物体内试验所用的试剂
        2.1.7 PCR实实验材料
        2.1.8 细胞转染试验中用到的试剂
        2.1.9 流式细胞仪检测细胞凋亡试剂盒
        2.1.10 一步法TUNEL检测细胞凋亡
        2.1.11 Western Blot所需试剂
        2.1.12 中量提取质粒所需试剂
        2.1.13 细胞ELISA检测试剂盒
    2.2 主要仪器设备
    2.3 主要实验方法
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 细胞传代
        2.3.3 细胞冻存
        2.3.4 细胞复苏
        2.3.5 小量中提质粒
        2.3.6 用所提取的质粒转染细胞
        2.3.7 细胞总RNA的提取
        2.3.8 RT-PCR
        2.3.9 Real-time PCR
        2.3.10 Western-blot检测细胞蛋白水平
        2.3.11 Transwell(小室)实验
        2.3.12 ELISA检测细胞培养上清或小鼠血清中细胞因子的含量
        2.3.13 流式细胞术检测细胞凋亡
        2.3.14 一步法TUNEL检测细胞凋亡
        2.3.15 小鼠黑色素瘤模型的建立
        2.3.16 统计学分析
3 实验结果
    3.1 黑色素瘤中Pim-3高表达
    3.2 ssRNA-Pim-3-shRNA双功能质粒在黑色素瘤中的功能验证
    3.3 ssRNA-Pim-3-shRNA双功能质粒对B16细胞凋亡的影响
    3.4 ssRNA-Pim-3-shRNA双功能质粒对B16细胞增殖和周期的影响
    3.5 ssRNA-Pim-3-shRNA双功能质粒体内抑制肿瘤的作用
    3.6 NK、CD8⁺T细胞在双功能载体介导的抗肿瘤治疗中发挥作用
    3.7 pDC在双功能载体介导的抗肿瘤治疗中发挥作用
    3.8 双功能载体及Pim-3-shRNA抑制黑色素瘤的肺转移
    3.9 沉默Pim-3抑制B16细胞的迁移和侵袭
    3.10 沉默Pim-3抑制B16细胞的上皮间质转换
    3.11 Pim-3通过p-STAT3介导B16细胞的转移侵袭
5 讨论
参考文献
文章创新点及意义
攻读学位期间取得的成果和奖励
致谢
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：3775423