IL-24基因对B16细胞移植瘤抑制作用的探讨

发布时间：2023-10-31 19:52

　　目的：研究重组质粒pEGFP-N1-IL-24基因对黑色素瘤B16细胞小鼠移植瘤的抑制作用及作用机制。 方法： 取6周龄C57BL/6小鼠,于背部注射5×106cell/mL黑色素瘤B16细胞悬液0.2mL。将构建成功的黑色素瘤B16细胞小鼠模型,随机分为3组,分别向瘤体内注射脂质体包裹的基因重组质粒pEGFP-N1-IL-24(实验组),pEGFP-NI(阴性对照组)和PBS缓冲液(阴性对照组)。共注射4次,每3d注射一次。最后一次注射7d后,处死小鼠,取肿瘤组织。每只小鼠肿瘤组织分成3份,分别应用HE染色对肿瘤组织形态进行观察,RT-PCR法测定移植瘤中Bax,Bcl-2和VEGF三种mRNA的表达,Western Blot;方法研究肿瘤细胞凋亡情况。其中RT-PCR与Western Blot方法所测定的结果,各mRNA和蛋白的表达量均用灰度值表示,并且通过内参的灰度值进行校正,以相对灰度值进行体现。数据用SPSS19.0进行分析,结果用x士s表示。 结果： 1.在小鼠接种黑色素瘤B16细胞后,约12d接种背部均产生0.05cm左右的瘤体,证明造模成功。 2.经HE染色发现实验组肿...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表
第一章 前言
第二章 实验材料
    2.1 主要实验材料
    2.2 实验试剂
    2.3 实验耗材和仪器
        2.3.1 实验耗材
        2.3.2 实验仪器
    2.4 培养基和溶液的配制
        2.4.1 培养基的配制
        2.4.2 溶液的配制
第三章 实验方法
    3.1 质粒DNA的制备
        3.1.1 菌种E.coli的复苏和扩大培养
        3.1.2 质粒DNA的大量提取
    3.2 黑色素瘤B16细胞的培养
        3.2.1 B16细胞的复苏
        3.2.2 细胞的换液与传代
        3.2.3 B16细胞计数方法
        3.2.4 细胞冻存
    3.3 移植瘤小鼠模型的建立
    3.4 石蜡切片的制作与HE染色
        3.4.1 石蜡切片的制作
        3.4.2 HE染色
    3.5 RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应)法鉴定Bax,Bcl-2,VEGF的表达
        3.5.1 肿瘤细胞总RNA的提取
        3.5.2 RNA纯度测定
        3.5.3 逆转录合成cDNA
        3.5.4 引物设计
        3.5.5 PCR扩增反应
        3.5.6 扩增产物电泳分析
    3.6 Western Blot检测Bax,Bcl-2,VEGF蛋白的表达
        3.6.1 收集蛋白样本
        3.6.2 SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶)电泳
    3.7 统计学处理
第四章 实验结果
    4.1 小鼠移植瘤模型的成功建立及3组肿瘤的HE染色
    4.2 RT-PCR检测IL-24对3组肿瘤组织中Bax,Bcl-2,VEGF mRNA表达的影响
    4.3 Western Blot检测IL-24对3组肿瘤组织中Bax,Bcl-2,VEGF蛋白表达的影响
第五章 讨论
第六章 结论
参考文献
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3859378