微小RNA-363-3p靶向调控PTEN及对黑色素瘤细胞侵袭迁移的影响

发布时间：2024-01-21 10:59

　　目的探讨微小RNA-363-3p(miR-363-3p)对10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)的靶向调控作用及黑色素瘤细胞侵袭迁移的影响。方法采用Tumor-miRNA-Pathway网站在线分析miR-363-3p在皮肤黑色素瘤组织中的水平及参与调控的信号通路情况;荧光定量PCR(q PCR)检测正常人皮肤黑色素细胞PIG1和人恶性黑色素瘤细胞A375的miR-363-3p水平。脂质体法向A375细胞转染miR-363-3p抑制剂(Inhibitor组)和阴性无关序列(NC组)并设未转染的细胞为对照组,q PCR检测转染48 h后的miR-363-3p水平以评估转染效率,划痕实验和Transwell小室实验检测划痕愈合率和穿膜细胞数,Target Scan7.1在线预测miR-363-3p与PTEN的靶向结合序列并通过荧光素酶报告基因验证两者的靶向关系,q PCR和Western blotting检测PTEN、基质金属蛋白酶(MMP)-3、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)和磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(p-Akt1)水平。结果在线分析显示皮肤黑色素瘤组织的m...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞和主要试剂
    1.2细胞培养和处理
    1.3 总RNA提取和q P CR
    1.4 迁移侵袭能力评估
    1.5 Western blotting
    1.6荧光素酶报告基因实验
    1.7 统计学分析
2 结果
    2.1 黑色素瘤组织的miR-363-3p水平
    2.2 黑色素瘤细胞的miR-363-3p水平
    2.3 下调miR-363-3p对A375细胞迁移的影响
    2.4 下调miR-363-3p对A375细胞侵袭的影响
    2.5 下调miR-363-3p对A375细胞MMP-3、p-PI3K和p-Akt水平的影响
    2.6 miR-363-3p和PTEN的靶向关系验证
3 讨论



本文编号：3881853