IL-31在皮肤炎症中的作用及作用机制研究

发布时间：2024-01-24 09:24

　　目的:克隆人IL-31基因、构建原核及真核表达载体,在大肠杆菌及哺乳动物细胞中表达,纯化IL-31蛋白,研究其在皮肤炎症中的作用及作用机制。 方法:PMA、PHA刺激正常人外周血单个核细胞,提取细胞总RNA,采用RT-PCR克隆人IL-31基因,将其克隆到原核表达载体pET28a(+),通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达;同时将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)A,将重组质粒转染CHO细胞,用RT-PCR和western-blot分析rhIL-31在CHO细胞中的表达。Ni树脂纯化在原核及真核细胞表达的his融合蛋白;用不同剂量rhIL-31刺激人表皮角质细胞HaCaT,利用transwell穿孔板检测HaCaT细胞培养上清对外周血单个核细胞的趋化作用,RT-PCR、荧光定量PCR检测巨噬细胞炎性蛋白-3β(MIP-3β)、胸腺和活化调节趋化因子(TARC)、巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)及T细胞活化蛋白-3(TCA-3/I-309)的表达,western-blot检测STAT1、STAT3、STAT5磷酸化;小鼠皮内注射该目的蛋白,观察局部炎症表现,皮...

【文章页数】：83 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
引言
第一部分 hIL-31基因克隆、在原核细胞中的表达 及多克隆抗体的制备
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
    参考文献
第二部分 IL-31诱导小鼠皮肤炎症
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
    参考文献
第三部分 IL-31对人表皮角质细胞的作用
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
    参考文献
第四部分 hIL-31在真核细胞中的表达及对 人表皮角质细胞的作用
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
    4 参考文献
结论
综述
    参考文献
攻读学位期间发表和待发表的文章
缩略词语
致谢



本文编号：3883558