自噬在mTOR抑制剂抗瘢痕疙瘩成纤维细胞效应中的作用研究

发布时间：2024-01-24 11:28

　　目的:mTOR信号与细胞的增殖、生长、代谢等活性密切相关,更为重要的是mTOR是自噬调控信号中的重要组成部分,而自噬同样与细胞的增殖等生物学功能上密切相关。然而,mTOR/自噬信号通路对瘢痕疙瘩的作用仍未阐明。本研究分析瘢痕疙瘩患者中mTOR信号通路的活化情况及细胞的自噬水平,探讨mTOR抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)和KU-0063794在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的生物学效应,进一步探究自噬机制在mTOR抑制剂发挥功能效应中的作用。方法:1.分别在瘢痕疙瘩组织水平及其成纤维细胞水平,采用免疫组织化学染色及Western Blot的方法检测mTOR和下游信号分子S6以及自噬相关蛋白LC3、ULKI、ATG7、ATG9A、ATG12的表达情况;细胞进行吖啶橙(AO)荧光染色,观察胞浆内酸性囊泡的形成情况。2.以瘢痕疙瘩成纤维细胞为研究对象,分别给予mTOR抑制剂处理,包括100 nM雷帕霉素或5 μM KU-0063794刺激不同时间点,分别通过CCK-8实验及BrdU掺入实验检测其对细胞增殖的影响;Annexin V-EGFP/PI双染通过流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,同时,We...

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【学位级别】：博士

图２?ｍＴＯＲ信号通路摘自ＣＳＴ公司官方网站ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｅｌｌｓｉｇｎａｌ．ｃｏｍ??８??

图３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ方法检测正常成纤维细胞及瘢痕疙瘩成纤维细胞中ｍＴＯＲ及下游??效应分子的表达??

图５瘢痕疙瘩组织水平ｍＴＯＲ通路表达情况Ａ．免疫组织化学染色的方法原位标??记ｍＴＯＲ及下游效应分子Ｓ６及其磷酸化形式的表达情况（１０〇ｘ）?Ｂ．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ??

图６瘢痕疙瘩组织中检测自噬标志蛋白的表达情况ａ．免疫组织化学染色法检测??

本文编号：3883732