寻常型天疱疮抗原桥粒芯糖蛋白4片段的克隆和免疫识别初步研究

发布时间：2024-03-25 22:08

　　天疱疮(pemphigus)是自身抗体介导作用于表皮角质形成细胞桥粒芯糖蛋白的自身免疫性大疱性皮肤和粘膜疾病，寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris，PV)是其中最为常见的亚型。尽管已经公认桥粒芯糖蛋白-1(desmoglein 1，Dsg1)和桥粒芯糖蛋白-3(desmoglein 3，Dsg3)及其自身抗体与天疱疮发病相关，但其确切的发病机制仍不清楚。新近有研究发现了人体组织桥粒芯糖蛋白-4(desmoglein4，Dsg4)是PV自身抗体的靶抗原，为该病的研究提供了新的线索。 本项研究目的是扩增人皮肤组织Dsg4胞外域(extracellular domains，ECD)EC1、EC2、EC3和EC4的核酸序列，进一步探讨其在PV发病中的作用。 首先根据Genebank中人Dsg4的cDNA序列资料，设计Dsg4胞外域EC1、EC2、EC3和EC4 4个DNA片段的特异性引物，通过逆转录聚合酶链反应(reverse-transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)法，以提取的人正常皮肤组织总RNA为模板，扩...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1质粒pET32a的物理图谱

人皮肤组织来源于四川大学华西医院皮肤性病科门诊色素痣切除术所带病变周围正常活体组织，供者为男性，23岁。原核表达质粒pET32a(质粒物理图谱见附图1)、宿主菌(大肠杆菌DH5a)和表达宿主菌(大肠杆菌BLZ)I菌株由四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室提供。2、主要试剂....

图2人皮肤组织总RNA电泳图谱

1、表皮组织RNA琼脂糖凝胶电泳分析表皮组织总RNA提取产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分析，55、185、285条带清晰(图2)，说明RNA无降解。123生2851855S图2人皮肤组织总RNA电泳图谱Fig.2EleetroPhorogramoftotalRNArfomhuman....

图4aDgs4ECI的DNA序列

图4aDgs4ECI的DNA序列Fig.4aDNASequeneeofDsg4ECI

图4b重组融合Dsg4Ecl蛋白表达质粒阳性克隆的测序结果

图4aDgs4ECI的DNA序列Fig.4aDNASequeneeofDsg4ECI

本文编号：3938915