TNFR-1在小鼠毛囊周期中的表达及其作用初步探讨

发布时间：2017-05-31 23:08

  本文关键词：TNFR-1在小鼠毛囊周期中的表达及其作用初步探讨，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：毛囊是表皮重要的附属器官，它控制着毛发的生长，对动物的生存有重要的作用。在动物的一生中毛囊都会经历生长期、退化期和静止期的周期性的循环变化来实现毛发生长和更新。在生长期，毛母质细胞会迅速增殖分化形成内根鞘和毛干，毛囊得以向下生长，与此同时，部分毛囊细胞也发生一定程度的细胞凋亡，以此避免细胞的过度增殖；退化期，毛囊因其下段细胞发生大量凋亡而变短且毛乳头逐渐上移；在毛乳头上移至毛囊隆突区bulge下方时毛囊即进入静止期。在与毛囊周期性循环的维持相关的各种信号通路中，TNF-α信号通路起着重要作用。TNF-α信号转导可引起许多细胞内的反应来促进细胞增殖，分化，调亡和诱发炎症。TNFR-1作为TNF-α信号转导中起重要的也是起最主要作用的膜受体，其在出生后的小鼠毛囊周期中的表达部位及在小鼠毛囊周期中的表达规律尚没有系统的研究。 目的：研究肿瘤坏死因子受体1（TNFR-1）在毛囊周期中表达的规律及初步作用。可以为揭示其在毛发周期中及周期的各阶段转换中所起的作用奠定一定基础，也可以为研究胞外信号通路在毛囊中的作用机制带来启发，特别是为进一步研究TNF-α信号通路对毛囊周期的调控提供了基础依据。 方法：采用石蜡切片免疫荧光、Western blot、RT-PCR等方法检测小鼠毛囊生长期、退化期和静止期各时期TNFR-1的表达情况（取出生后P8d、P15d、P18d、P24d4个时相点）；免疫荧光检测毛囊细胞分化标记物AE13和AE15的周期性表达；TUNEL检测毛囊周期中的细胞凋亡情况。 结果：实验结果表明在所有4个时相点的皮肤中TNFR-1都存在不同强度的表达，TNFR-1mRNA从生长期中期(P8d)到生长期末期(P15d)表达量升高到较高水平，退化期(P18d)和静止期(P24d)表达维持在较低水平；TNFR-1蛋白在生长期中期(P8d)和生长期末期(P15d)表达最强，而退化期(P18d)到静止期(P24d)表达减弱并维持较弱的表达。免疫荧光的结果显示:TNFR-1在生长期主要表达于表皮层，毛囊的毛干和内根鞘以及毛母质，生长末期在外根鞘还出现明显表达；退化期在外根鞘、毛干及表皮层有表达，在次级毛芽出现很强的特异性表达；在静止期表皮层及杵状毛中呈现弱表达。AE13在生长期主要表达于表皮层以及毛干的皮质和毛小皮；退化期P18d在毛干尤其是毛干基部端（即角质化区域和杵状毛形成区）强表达；在静止期P24d弱表达于表皮层及杵状毛中。AE15在生长中期P8d主要表达于毛囊内根鞘和毛干髓质，从荧光亮度来看表达最强；生长末期P15d在内根鞘和毛干髓质也有表达，但是表达强度明显变弱；退化期P18d仅在毛囊残余内根鞘有少许表达；在静止期P24d毛囊中无明显AE15表达。TUNEL检测细胞凋亡结果显示：在生长期TUNEL阳性染色主要出现在表皮层，毛囊的毛干、内根鞘以及毛母质，生长末期还出现在外根鞘；在退化期P18d出现在外根鞘、表皮层以及毛干基部端；在静止期P24d出现在表皮层、杵状毛、bulge区和皮脂腺。 结论：在毛囊周期中，TNFR-1的表达具有高度的时空特异性，，其表达与毛囊细胞终末分化和凋亡相关。
【关键词】：肿瘤坏死因子受体1 毛囊周期 小鼠 分化 凋亡
【学位授予单位】：重庆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R751
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-16
• 1.1 研究背景及国内外研究现状9-14
• 1.1.1 研究背景9-14
• 1.1.2 国内外研究现状14
• 1.2 研究意义和研究内容14-16
• 2 TNFR-1 在小鼠毛囊中的周期性表达16-39
• 2.1 引言16-17
• 2.2 材料与方法17-32
• 2.2.1 实验动物17-18
• 2.2.2 实验设备18
• 2.2.3 药品和试剂18-20
• 2.2.4 主要试剂的配制20-22
• 2.2.5 实验方法22-32
• 2.3 实验结果32-36
• 2.3.1 TNFR-1 mRNA 在小鼠背部皮肤中的表达32-33
• 2.3.2 TNFR-1 蛋白在小鼠背部皮肤中的表达33
• 2.3.3 TNFR-1 蛋白在小鼠背皮毛囊中的表达分布33-36
• 2.4 讨论36-38
• 2.5 小结38-39
• 3 TNFR-1 在小鼠毛囊周期中的表达作用初探39-47
• 3.1 引言39
• 3.2 材料与方法39-41
• 3.2.1 实验设备39-40
• 3.2.2 药品和试剂40
• 3.2.3 主要试剂的配制40
• 3.2.4 实验方法40-41
• 3.3 实验结果41-45
• 3.3.1 AE13 在小鼠背皮毛囊中的表达分布41-43
• 3.3.2 AE15 在小鼠背皮毛囊中的表达分布43-44
• 3.3.3 TUNEL 法检测小鼠背皮毛囊细胞凋亡44-45
• 3.4 讨论45-46
• 3.5 小结46-47
• 4 结论与展望47-49
• 4.1 全文总结47-48
• 4.2 展望48-49
• 致谢49-50
• 参考文献50-54
• 附录 作者在攻读学位期间发表的论文目录54

【共引文献】

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本文编号：410915