全基因组外显子测序搜寻常染色体显性遗传性单纯性少毛症致病基因

发布时间：2017-06-02 19:20

  本文关键词：全基因组外显子测序搜寻常染色体显性遗传性单纯性少毛症致病基因，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景遗传性少毛症是一组表现为毛发持续性部分或完全缺失的遗传性疾病,该组疾病具有临床和遗传上的异质性。通常会在出生时或在婴幼儿时期开始发病,往往持续终生。患者头发、眉毛、睫毛、体毛、阴毛和腋毛均可受累。该组疾病根据遗传方式不同可分为常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传和X连锁显性或隐性遗传。常染色体显性遗传性单纯性少毛症(ADHS)是一种以毛囊微型化为特征的常染色体显性遗传性脱发疾病。近年来关于ADHS的分子遗传学研究已经取得了重要的进展,其三个不同的亚型分别定位在APCDD1(18p11.22),RPL21(13q12)和SNRPE(1q31.3-1q41),但其发病机制尚未完全明确。 目的确定1个常染色体显性遗传性秃发/少毛症大家系的致病基因,从分子遗传学水平阐明其发病机制,为下一步开展基因诊断和遗传咨询奠定基础。 方法(1)从该家系中挑选出2个临床表型典型的患者和2个家系内对照,进行全基因组外显子测序,获得全基因组外显子序列；(2)通过逐步滤过dbSNP数据库和家系内对照中的常见突变,并且结合前期定位信息获得候选基因集；(3)利用Sanger测序在家系内(8个患者和8个正常人)中对候选基因集的突变位点进行测序验证,分析突变点是否与疾病共分离,获得候选基因。 结果(1)全基因组外显子测序得到119个变异位点,后通过Sanger测序在排除了曾定位的染色体2p25.1-2p23.2上唯一的突变(NM_145693:exon12:c.1645AG: p.K549E)。(2)在该其它一些可能的基因(RPL21、APCDD1、SNRPE)寻找可能的致病突变,最终在该家系全部患者及一个正常人的RPL21基因上发现一个杂合错义突变(NM_000982:exon3:c.95GA:p.R32Q),与之前报道的两个中国HHS家系中检测到的突变相同。(3)随访发现,该家族中1例患者死于不明原因的吞咽困难,2例确诊患有食管癌。 结论(1)RPL21基因上的杂合错义突变(c.742CA,p.H248N)是一例ADHS的分子遗传学发病基础。(2)一例携带该突变的表型正常的家庭成员可能是一个不完全外显的患者。(3)RPL21基因突变还可能与该家族食管癌发病有关。
【关键词】：常染色体显性 遗传性少毛症 突变 RPL21基因
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R758.71
【目录】：

• 目录4-6
• 英文缩略词表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1. 引言11-14
• 2. 材料与方法14-30
• 2.1 研究对象14-16
• 2.2 实验试剂16-18
• 2.2.1 DNA提取试剂16
• 2.2.2 DNA标准化试剂16
• 2.2.3 电泳试剂16-17
• 2.2.4 全基因组外显子测序试剂17
• 2.2.5 PCR扩增试剂17
• 2.2.6 PCR产物纯化和测序试剂17-18
• 2.3 实验仪器18-21
• 2.3.1 临床资料获取及毛发扫描电镜检查18
• 2.3.2 DNA提取器材18-19
• 2.3.3 检测浓度仪器19
• 2.3.4 电泳的仪器19
• 2.3.5 全基因组外显子测序仪器19-20
• 2.3.6 PCR仪器20-21
• 2.3.7 Sanger测序仪器21
• 2.4 分析软件和电子数据库查询21
• 2.5 实验方法和步骤21-30
• 2.5.1 毛发标本采集及扫描电镜检查22
• 2.5.2 基因组DNA的提取22-23
• 2.5.3 DNA浓度标准化23
• 2.5.4 全基因组外显子测序23-25
• 2.5.5 LPIN1基因和RPL21基因引物的设计和合成25-27
• 2.5.6 PCR反应27-28
• 2.5.7 PCR产物琼脂糖凝胶电泳28-29
• 2.5.8 PCR产物纯化29
• 2.5.9 PCR片段测序29-30
• 3. 实验结果30-38
• 3.1 全基因组外显子测序结果30-37
• 3.2 致病基因突变检测结果37-38
• 4. 讨论38-41
• 5. 结论41
• 6. 参考文献41-45
• 附录45-47
• 致谢47-48
• 课题综述 遗传性秀发/少毛症研究进展48-63
• 参考文献58-63

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 陆平;李云鹏;高岩;刘景波;赵文杰;刘言;邢春艳;;原癌基因Pim-3在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌细胞增殖的相关性[J];癌变.畸变.突变;2014年01期

2 彭正科;刘娜;黄大毛;唐发清;;二亚硝基哌嗪上调HSP70-2促进鼻咽癌细胞转移[J];肿瘤;2014年01期

3 Ying-Yi Li;Naofumi Mukaida;;Pathophysiological roles of Pim-3 kinase in pancreatic cancer development and progression[J];World Journal of Gastroenterology;2014年28期

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本文编号：416322