不同剂量中波紫外线对HaCaT细胞p62及自噬体形成关键基因Beclin-1、Atg12和Atg3的调控效应研究

发布时间：2017-06-04 23:02

  本文关键词：不同剂量中波紫外线对HaCaT细胞p62及自噬体形成关键基因Beclin-1、Atg12和Atg3的调控效应研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景中波紫外线主要作用于表皮,角质形成细胞是其重要的靶细胞,可以引起角质形成细胞内的蛋白损伤,而有效地清除损伤蛋白对于维持细胞内环境的稳定至关重要。p62是一种具有多种生物学功能的泛素结合蛋白,其C端的泛素相关(ubiquitin-associated, UBA)结合区可识别错误折叠蛋白的泛素部位,p62通过LC3相互作用区域(LC3-interacting region, LIR)与LC3结合,并在泛素化蛋白上共定位,形成的多聚泛素化蛋白-p62复合物通过自噬途径降解。因此p62是联系泛素化蛋白和自噬途径重要的中介物。自噬是广泛存在于真核细胞的生理现象,其主要功能是降解变性蛋白质及受损细胞器。研究发现角质形成细胞也存在自噬现象,并可减轻角质形成细胞的炎症。然而,UVB损伤是否可以诱导角质形成细胞的p62蛋白表达变化,以及损伤细胞中p62的表达差异是否与自噬体形成产生生物学关联,这些问题的答案目前尚不得而知。在这个研究中,我们对此问题做出初步探索。通过我们的研究有助于初步明确以紫外线损伤是否对角质形成细胞中p62为核心的蛋白降解途径产生影响。 目的探讨不同剂量中波紫外线(UVB)照射培养的HaCaT细胞后不同时间点对p62、Beclin-1、Atgl2和Atg3蛋白表达水平的调控效应。 方法4.5、10和50mJ/cm2UVB照射HaCaT细胞后4h,使用透射电镜检测细胞超微结构变化。4.5、10和50mJ/cm2UVB照射HaCaT细胞,照射后加入新鲜培养基继续培养4h和12h,同时设相同处理但不照射UVB的细胞为对照细胞。另设观察组,在照射后立即(包括对照细胞),使用含蛋白酶抑制剂E64D(10μg/L)和胃酶抑素(10μg/L)的培养基孵育4h和12h,以阻断对p62的降解。使用Western印迹法测定HaCaT细胞p62、Beclin-1、Atgl2和Atg3蛋白的表达水平。 结果4.5、10mJ/cm2UVB照射后,HaCaT细胞内出现自噬体结构,并且这种结构在4.5mJ/cm2照射后更为多见,然而,50mJ/cm2UVB照射后,细胞中罕有此类结构。50mJ/cm2UVB照射HaCaT细胞后4h,p62表达水平(p62与内参的比值为0.473±0.022)较对照细胞(0.246±0.038)升高(t=15.27,P0.05)；阻断溶酶体后,细胞新生p62水平(0.445±0.035)与阻断溶酶体的对照(0.244±0.016)相比,仍为上调(t=7.62,P0.05)。在4.5mJ/cm2UVB照射细胞后12h,与对照(0.254±0.035)相比,HaCaT细胞p62表达上调(0.497±0.047,t=22.89,P0.05)；阻断溶酶体后,与阻断溶酶体的对照(0.257±0.025)相比,p62表达水平仍然上调(0.548±0.051,t=17.42,P0.05)。4.5mJ/cm2和50mJ/cm2UVB照身寸后4h和12h,对照细胞和照射细胞间的Beclin-1、Atgl2和Atg3的表达差异均无统计学意义(P0.05),阻止溶酶体对自噬体内容物的降解也未能发现Beclin-1、Atg12和Atg3的表达差异(P0.05)。 结论小剂量UVB照射角质形成细胞后有自噬体形成；而高剂量UVB照射细胞后没有明显的自噬体产生。p62表达在不同剂量UVB照射和照射后不同时间存在差异调控,并且这种调控效应与自噬体形成可能没有生物学联系。
【关键词】：紫外线 角蛋白细胞 原癌基因蛋白质类 Beclin-1Atg12Atg3
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R751
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 缩略语/符号说明9-10
• 前言10-15
• 研究现状、成果10-14
• 研究目的、方法14-15
• 1、材料15-16
• 1.1 、细胞15
• 1.2 、试剂15-16
• 1.3 、仪器16
• 2、方法16-24
• 2.1 、细胞培养16-18
• 2.2 、UVB照射18-19
• 2.3 、透射电镜分析19
• 2.4 、Western Blot实验19-24
• 3、结果24-34
• 3.1 、常规细胞形态学改变24-25
• 3.2 、透射电镜观察超微结构25-29
• 3.3 、UVB照射对HaCaT细胞p62表达的调控29-32
• 3.4 、4.5 mJ/cm2和50 mJ/cm2UVB对HaCaT细胞Beclin-1、Atg12和Atg3的表达调控32-34
• 4、讨论34-37
• 结论37-38
• 参考文献38-42
• 发表论文和参加科研情况说明42-43
• 综述、x线治疗某些皮肤病的研究进展43-51
• 参考文献49-51
• 致谢51-53
• 附件53

【共引文献】

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本文编号：422324