SOX4在黑素瘤发生发展中的作用及机制研究
发布时间：2017-06-25 16:04
本文关键词：SOX4在黑素瘤发生发展中的作用及机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：研究背景黑素瘤是来源于黑素细胞的具有高度侵袭性的皮肤恶性肿瘤,早期诊断并行手术切除的黑素瘤预后良好,而中晚期黑素瘤预后差,致死率高,严重危害我国人民健康及生活质量。目前已发现黑素瘤是多因素、多阶段、多种分子事件共同作用导致的恶性疾病,其中异常活性的转录因子可以通过调控下游靶基因而引起细胞下游信号转导通路的改变,继发性影响细胞增殖与凋亡,侵袭与转移等生物学行为,最终造成黑素细胞的恶性转化。然而现有的分子机制研究尚不足以十分明晰黑素瘤发生发展乃至侵袭转移的具体机理。因此,探索黑素瘤发生发展及侵袭转移的分子生物学机制,并进一步转化应用于疾病的预防与治疗,对降低黑素瘤患者死亡率和改善黑素瘤患者预后具有显著意义。SOX家族为一类调控组织特异性、器官发育、细胞分化的转录因子,可以通过转录水平激活或抑制下游基因及通路,参与并调控多种恶性肿瘤的发生发展及侵袭转移行为。SOX4属于SOX C亚家族成员,不仅在维持细胞干性,促进骨及神经组织正常发育中发挥重要作用,还在多种恶性肿瘤中异常表达且与肿瘤患者的预后及生存期相关。越来越多的研究显示,SOX4可以通过影响细胞增殖,周期,凋亡等过程参与乳腺癌,肝癌,结肠癌等恶性肿瘤的发生发展,并且有针对SOX4的T细胞及抗体表位肽研究应用于肺癌的疫苗研制,靶向抑制转录因子SOX4的表达及调节其触发的相关免疫反应可有效地抑制肿瘤的发生发展。这强烈提示SOX4具有成为免疫疫苗靶点及治疗肿瘤疾病靶点的巨大潜力。然而,SOX4与其调控的下游靶基因及信号转导通路在黑素瘤发生发展中的详尽作用及具体机制尚不明确。阐明SOX4在黑素瘤发病机制中的具体作用,并探讨挖掘其治疗潜能,可为靶向治疗黑素瘤及研制黑素瘤疫苗提供理论依据及实验基础。本课题拟通过检测转录因子SOX4在转移性黑素瘤,原发黑素瘤,色素痣以及黑素瘤细胞系中的表达水平,并从分子生物学水平研究转录因子SOX4对黑素瘤增殖,侵袭及转移能力的影响,进而阐明SOX4在黑素瘤发生发展及侵袭转移中的作用和具体机制,为黑素瘤临床诊疗及预后提供重要的理论依据。研究方法1.Real-time PCR法,western blot方法检测转录因子SOX4在色素痣,原发黑素瘤和转移性黑素瘤中的表达情况。2.Western blot方法检测恶性黑素瘤细胞系中SOX4在蛋白水平的表达。3.使用转染试剂将特异靶向SOX4的si RNA转入黑素瘤细胞系A2058,WM35中,降低细胞内源性SOX4的表达水平。4.流式细胞术检测细胞周期和凋亡水平以观察转录因子SOX4对转染细胞体外生物学行为的影响。5.建立SOX4慢病毒稳转染细胞系,real-time PCR及western blot方法检测SOX4水平是否下调,以此判断细胞系是否建立成功。为下一步深入机制研究奠定基础。6.在成功建立的SOX4低表达的慢病毒稳转细胞系中,对EMT的标志物E-cadherin进行检测。研究结果1.SOX4在黑素瘤组织和黑素瘤细胞系中的表达在RNA水平上,转录因子SOX4在转移性黑素瘤中的表达水平显著高于原发黑素瘤及色素痣,原发黑素瘤与色素痣中SOX4的表达水平没有明显差异。色素痣中p53的表达水平明显高于转移性黑素瘤和原发黑素瘤。Real-time PCR显示相对瘤旁组织,瘤中心组织的SOX4水平明显升高。Western blot法检测显示在蛋白水平上,原发黑素瘤及转移性黑素瘤的SOX4表达水平高于色素痣组织,同时多个黑素瘤细胞系都检测到了转录因子SOX4的表达,且A2058及WM35细胞系中的表达量最为突出,于是选取此两种细胞系作为下一步检测生物学行为的实验对象。2.SOX4对黑素瘤细胞生物学行为的影响瞬时转染SOX4 si RNA后的黑素瘤细胞系A2058及WM35,相比对照组,SOX4表达水平降低,同时黑素瘤细胞的生长速度减慢,G l期进入S期的细胞比例减少,细胞凋亡指数增加。3.成功构建SOX4的慢病毒稳转A2058细胞系,在蛋白及m RNA水平上验证了SOX4的下调表达。4.成功建立慢病毒转染A2058细胞系,western blot检测显示,当SOX4水平降低时,E-cadherin表达水平下降。研究结论:1.本研究通过检测发现,在m RNA水平上,转录因子SOX4在黑素瘤组织中的表达水平明显高于原发黑素瘤组织和色素痣组织,但原发黑素瘤组织与色素痣组织之间无明显差异。在蛋白水平上,转录因子SOX4在转移性黑素瘤组织和原发性黑素瘤组织中的表达水平均明显高于色素痣组织。得出结论,SOX4参与黑素瘤的发生发展及侵袭转移。2.通过黑素瘤细胞系A2058及WM35瞬时转染SOX4 si RNA的实验,在m RNA及蛋白水平上证实SOX4表达水平降低后,进行细胞流式实验。结果显示:相比阴性对照组,SOX4 si RNA组的黑素瘤细胞生长速度减慢,G l期进入S期的细胞比例减少,细胞凋亡指数增加。这说明转录因子SOX4可以抑制黑素瘤细胞的凋亡,使G l期进入S期的细胞比例增加,加强黑素瘤细胞的增殖能力。3.成功建立SOX4低表达的慢病毒稳转细胞系A2058,并检测该细胞系EMT相关基因E-cadherin的表达情况。在蛋白水平上证明了转录因子SOX4与E-cadherin呈正相关性。说明SOX4可能通过EMT相关蛋白分子促进黑素瘤细胞的侵袭转移。
【关键词】：黑素瘤 转录因子 SOX4 EMT 侵袭转移
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.5
【目录】：
- 缩略语表4-7
- 中文摘要7-10
- 英文摘要10-14
- 前言14-16
- 文献回顾16-24
- 实验一 转录因子SOX4在恶性黑素瘤组织和细胞中的表达及意义24-36
- 1 材料24-29
- 2 方法29-32
- 3 结果32-34
- 4 讨论34-36
- 实验二 转录因子SOX4对黑素瘤细胞周期及凋亡的影响36-46
- 1 材料36-40
- 2 方法40-42
- 3 结果42-45
- 4 讨论45-46
- 实验三 慢病毒稳转细胞系的建立，鉴定及黑素瘤发病机制的初步探讨46-52
- 1 材料46
- 2 方法46-48
- 3 结果48-50
- 4 讨论50-52
- 小结52-53
- 参考文献53-58
- 个人简历和研究成果58-59
- 致谢59
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 沈丹蓓,孙建方;以碱性成纤维细胞生长因子及其受体为靶点的黑素瘤治疗[J];国外医学.皮肤性病学分册;2003年06期
2 李玲,周华,宋伟民,苏瑾;长波紫外线照射对小鼠黑素瘤细胞的影响[J];环境与职业医学;2004年01期
3 刘厚广;李琛;尤艳;李海燕;孙桂珍;;黑素瘤细胞生长因子表达及微血管密度研究[J];临床皮肤科杂志;2006年07期
4 朱健伟;骆丹;;黑素瘤细胞粘附与迁移相关表面分子研究进展[J];肿瘤基础与临床;2006年06期
5 马枫茹;刘琨;张毅;潘石;吴世法;;单个人体黑素瘤细胞的原子力显微图像及拉曼光谱的研究[J];电子显微学报;2007年01期
6 姜培红;元雄良治;;白介素22在皮肤黑素瘤细胞中的表达[J];临床皮肤科杂志;2007年06期
7 陆原;翁翊;李清;何雯;金丽;陈达灿;y⒐
本文编号：482675
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/pifb/482675.html
最近更新
教材专著
