阿司匹林在H_2O_2诱导的人黑素细胞氧化应激损伤中的作用及机制研究

发布时间：2017-07-03 13:08

  本文关键词：阿司匹林在H_2O_2诱导的人黑素细胞氧化应激损伤中的作用及机制研究

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【摘要】：白癜风是临床常见的色素脱失性疾病，该病发病机制尚未充分阐明，治疗困难。本课题组及其他学者的研究证实氧化应激与白癜风密切相关。阿司匹林是临床常用的非甾体类抗炎药（NSAIDs），近年来的研究证实其具有抗氧化作用，在多种细胞和动物实验中显示有良好的抗氧化效果。我们推测阿司匹林在白癜风中可能亦有治疗作用，检索文献发现已有学者注意到了相关问题，并已证实低剂量阿司匹林可促进白癜风患者原代黑素细胞增殖，降低脂质过氧化，，临床试用后活动期白癜风停止进展。然而，目前相关研究文章仅4篇，特别是机制研究方面尚未涉及。我们的前期研究发现，Nrf2-ARE通路在黑素细胞对抗H_2O_2诱导的氧化应激中发挥重要作用，HO-1是其在黑素细胞抗氧化中主要的效应分子，并且白癜风黑素细胞抗氧化应激通路Nrf2-ARE存在缺陷，导致氧化应激时黑素细胞易受损伤，已有研究证实阿司匹林发挥抗氧化与诱导HO-1表达及生成NO相关。而HO-1是抗氧化通路Nrf2-ARE通路的下游分子，NO又是该通路的刺激剂。那么，阿司匹林是否确能保护人黑素细胞对抗氧化应激呢？其抗氧化作用是否系通过Nrf2-ARE通路及其下游分子来实现呢？针对这些问题，我们进行了本研究。 第一部分：阿司匹林在H_2O_2诱导的正常人黑素细胞系PIG1细胞及原代培养的黑素细胞氧化应激损伤中的作用 方法：不同浓度阿司匹林处理PIG1细胞24h，观察细胞形态，CCK-8测定细胞活力，筛选阿司匹林安全浓度。选用0.75mM H_2O_2诱导PIG1细胞氧化应激损伤，安全浓度阿司匹林预处理24h，采用拍照、CCK-8、流式细胞术和分光光度计观察细胞形态、活力、凋亡、胞内ROS水平和LDH释放率的变化。培养包皮来源的原代黑素细胞，采用S-100和MelanA染色鉴定。不同浓度阿司匹林处理24h后，拍照观察形态变化。选用0.75mM H_2O_2诱导氧化损伤，安全浓度阿司匹林预处理24h后，采用拍照和CCK-8法观察细胞形态和活力变化。 结果：10-90μM阿司匹林处理PIG1细胞24h，对细胞形态和活力无明显影响，270μM和810μM阿司匹林均不同程度影响到了黑素细胞形态和活力。用0.75mM H_2O_2诱导氧化损伤，10-90μM阿司匹林预处理PIG1细胞24h后，细胞形态有不同程度恢复，细胞活力显著升高，凋亡、LDH释放率显著降低，ROS水平不同程度降低。原代黑素细胞生长良好，纯度较高。10-90μM阿司匹林处理24h后，细胞形态无明显变化。用0.75mM H_2O_2诱导氧化损伤，10-90μM阿司匹林预处理24h后，细胞形态有不同程度恢复，细胞活力显著升高。 第二部分：阿司匹林保护人黑素细胞对抗H_2O_2诱导的氧化应激损伤的机制研究 方法：90μM阿司匹林处理PIG1细胞24h，western blot检测细胞的p-Nrf2和Nrf2变化，RT-PCR检测HO-1、NQO-1、GCLC、GCLM的mRNA水平。选用特异性Nrf2siRNA转染PIG1细胞48h后，选用0.75mM H_2O_2诱导PIG1细胞氧化应激损伤，90μM阿司匹林预处理24h后，采用拍照、CCK-8、流式细胞术和分光光度计观察细胞形态、活力、凋亡和胞内ROS水平的变化。 结果：90μM阿司匹林处理PIG1细胞24h后，细胞内的p-Nrf2和Nrf2显著增多，HO-1mRNA显著升高，NQO-1、GCLC、GCLM mRNA无显著变化。特异性Nrf2siRNA转染PIG1细胞后，90μM阿司匹林预处理PIG1细胞，细胞形态、活力、凋亡和胞内ROS水平与H_2O_2处理组无显著变化，阿司匹林细胞保护作用消失。 结论：低剂量阿司匹林（约等于人体服用100-1000mg阿司匹林后的最高血药浓度）对正常人黑素细胞无明显毒性；低剂量阿司匹林能够保护黑素细胞对抗H_2O_2诱导的氧化应激损伤，降低胞内的ROS；低剂量阿司匹林通过激活Nrf2-ARE通路及诱导HO-1表达，起到保护黑素细胞对抗氧化应激损伤的作用。
【关键词】：白癜风 氧化应激 H_2O_2 黑素细胞 阿司匹林
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R758.41
【目录】：

• 缩略语表5-8
• 中文摘要8-11
• Abstract11-15
• 前言15-17
• 文献回顾17-37
• 第一部分 阿司匹林在H2O2诱导的人黑素细胞系PIG1 细胞及原代培养的黑素细胞氧化应激损伤中的作用37-58
• 1 材料37-41
• 2 方法41-47
• 3 结果47-54
• 4 讨论54-58
• 第二部分 阿司匹林保护人黑素细胞对抗 H2O2诱导的氧化应激损伤的机制研究58-79
• 1 材料58-63
• 2 方法63-70
• 3 结果70-75
• 4 讨论75-79
• 小结79-81
• 参考文献81-89
• 附录89-91
• 个人简历和研究成果91-92
• 致谢92-93

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 周舟;高天文;;氧化应激与白癜风[J];中国美容医学;2009年07期

2 徐昱,严淑贤,胡跃;白癜风患者皮损与正常皮肤疱液中抗氧化酶和脂质过氧化物水平比较[J];检验医学;2004年04期

3 高天文,李强,李春英,李志强,王秋枫;白癜风2008例临床分析[J];中国皮肤性病学杂志;2002年05期

4 陈阳;黄维国;查定军;邱建华;王锦玲;沙素华;Jochen Schacht;;阿司匹林预防庆大霉素耳毒性的随机对照试验[J];中华耳科学杂志;2008年02期

5 何志旭,廖清奎,徐学聚,罗春华,周同甫,李钦伯,李丰益,金仲和;阿司匹林诱导内皮细胞铁蛋白表达与抗氧化损伤作用的研究[J];中华医学杂志;2001年09期

  本文关键词：阿司匹林在H_2O_2诱导的人黑素细胞氧化应激损伤中的作用及机制研究

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本文编号：513750