NRIP1在银屑病发病机制中的作用初步研究

发布时间：2017-07-14 22:36

  本文关键词：NRIP1在银屑病发病机制中的作用初步研究

  更多相关文章： 银屑病 核受体相互作用蛋白1(NRIP1) 核因子κ B(NF-κ B) 动物模型 CD4~+T细胞

【摘要】：背景：银屑病是一种反复发作的慢性炎症性疾病,困扰着世界上大约1-3%的人口。主要的病理表现为表皮角化过度及角化不全,棘层肥厚,炎性细胞浸润,及毛细血管扩张等。银屑病的发病与角质形成细胞和免疫反应功能紊乱密切相关,尤其是T细胞介导的免疫反应异常在银屑病发病中起到重要作用。而NF-κB作为细胞增殖、分化和凋亡以及炎症反应通路中的关键调节元件,已被证实在银屑病的发病中起到重要作用。NRIP1 (Nuclear Receptor Interacting protein 1),又被称作RIP 140 (Receptor Interacting Protein of 140 kDa),可与多种核受体相互作用,除了作为一种非典型的转录辅阻遏物,负性调节参与糖摄取、糖酵解、三羧酸循环、脂肪酸氧化、线粒体生成以及氧化磷酸化反应的基因转录外,也可以激活转录,如可促进NF-κB的激活并上调参与炎症反应的细胞因子的基因的表达,包括TNFα和IL-6等。结合NRIP1对NF-κB信号通路的激活作用以及NF-κB信号通路在银屑病发病机制中起到重要作用,我们推测NRIP1在银屑病的发病机制中可能起到一定作用。目的：检测银屑病患者皮肤组织及外周血单核细胞中NRIP1的表达情况；研究NRIP1对角质形成细胞和CD4+T细胞的活性、增殖和凋亡以及炎性信号通路的影响：通过构建银屑病样皮损的小鼠模型,研究Nrip1基因敲除对银屑病皮损的影响和机制。方法：1. 收集银屑病患者及正常对照者的皮肤组织及外周血单核细胞,通过免疫组化及real-time PCR方法,从蛋白质和mRNA水平检测NRIP1和NF-KB在银屑病患者的皮损及外周血中表达,分析其相关性。2. 利用sh-NRIP1转染沉默HaCaT细胞,分别用MTT法、Annexin V/PI staining法检测细胞的活性、增殖和凋亡情况,用real-time PCR及western-blot法检测NF-κB表达水平。3. 用不同剂量的UVB照射sh-NRIP1转染后的HaCaT细胞,分别用MTT法和Annexin V/PI staining法检测其增殖和凋亡水平的变化。4. 分离银屑病患者外周血的CD4+T细胞,利用siRNA转染沉默NRIP1的表达后,通过real-time PCR及ELISA法检测CD4+T细胞中NF-kB表达水平及细胞培养上清液中IL-17的分泌水平。5. 用C57BL/6野生型(WT)和Nrip1基因敲除(KO)小鼠,连续外用5%咪喹莫特(IMQ)乳膏5天,诱导银屑病样皮损,依据PASI评分和组织学检查评价皮损的严重程度；利用免疫荧光检测皮损中Nrip1、 NF-k B表达。结果：1. 免疫组化及real-time PCR结果显示NRIP1在银屑病患者皮损中表达明显高于非皮损及正常对照皮肤,而非皮损及正常皮肤间无显著差异；2. Real-time PCR结果显示NF- B (p65)在银屑病患者皮损中表达明显高于非皮损及正常对照皮肤,而非皮损及正常皮肤间无显著差异,且NF-KB(p65)与NRIP1表达无明显相关性：3. NRIP1在银屑病患者外周血单核细胞中的mRNA表达水平明显高于正常对照者；4. NF-κ B (p65)在银屑病患者外周血单核细胞中的mRNA表达水平明显高于正常对照者,且与NRIP1表达无明显相关性；-5. 特异性shRNA转染可有效沉默HaCaT细胞中NRIP1基因的表达；6. 沉默NRIP1基因可抑制HaCaT细胞的增殖,并诱导细胞凋亡：7. UVB照射可促进沉默NRIP1基因对HaCaT细胞凋亡的诱导；8. 特异性siRNA转染可有效沉默银屑病患者外周血 CD4+T细胞NRIP1基因的表达,并可降低NF-κB的表达水平和IL-17的分泌水平；9. 连续外用咪喹莫特乳膏可诱导WT和KO小鼠出现银屑病样皮损；10. Nripl基因敲除可延迟小鼠对咪喹莫特诱导的银眉病样皮损反应：11. Nrip1基因敲除可降低小鼠银屑病样皮损中NF-k B的表达水甲。结论：在银屑病忠者皮损及外闶血中,NRIPκ和NF-κB在mRNA和蛋白质水平均高表达；沉默NRI1可抑制HaCaT细胞增殖,促进细胞凋亡,降低NF-κB (p65)的表达水平,并可显著抑制银屑病患者外周血CD4+T细胞中NF-κB (p65)的表达和IL-17的分泌；在小鼠模型中,Nrip1基因敲除可通过抑制NF-κB表达从而延迟咪喹莫特诱导的银屑病样皮损炎症反应。综上所述,NRIP1可影响角质形成细胞的增殖和凋亡,并通过NF-κB通路影响CD4+T细胞的活化,从而影响银屑病皮损的形成,在银屑病的发病机制中起重要作用。
【关键词】：银屑病 核受体相互作用蛋白1(NRIP1) 核因子κ B(NF-κ B) 动物模型 CD4~+T细胞
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-19
• 参考文献16-19
• 第一部分 NRIP1在银屑病患者皮损及外周血中的表达情况研究19-31
• 引言19-20
• 材料与方法20-25
• 实验结果25-28
• 讨论28-29
• 参考文献29-31
• 第二部分 沉默NRIP1基因对HACAT细胞及银屑病患者外周血CD4~+T细胞的影响31-50
• 引言31-32
• 材料与方法32-40
• 实验结果40-46
• 讨论46-48
• 参考文献48-50
• 第三部分 NRIP1基因敲除对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损的影响50-61
• 引言50-51
• 材料与方法51-54
• 实验结果54-58
• 讨论58-59
• 参考文献59-61
• 全文小结61-62
• 综述一银屑病的表观遗传研究进展62-67
• 参考文献65-67
• 所获荣誉及发表文章67-69
• 致谢69-71

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本文编号：542520