钙泊三醇对人角质形成细胞S100A8表达的影响

发布时间：2017-07-19 10:26

  本文关键词：钙泊三醇对人角质形成细胞S100A8表达的影响

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【摘要】：一.研究背景及目的 银屑病是一类常见的慢性炎症性皮肤病,皮肤角质形成细胞的异常增殖和分化是银屑病发病的重要环节。人体皮肤是维生素D的合成场所,维生素D及其类似物钙泊三醇也可以作用于角质形成细胞,调节细胞增殖、分化和凋亡。同时在角质形成细胞内,抗菌肽S100A7、S100A8、S100A9可以与IL-17、IL-1、TNF-α等炎症因子相互促进,引起细胞异常增殖与分化,导致银屑病发病；已有研究证实维生素D可以通过拮抗S100A7表达减轻皮肤炎症反应,从而治疗银屑病。基于此,维生素D及其类似物是否可能通过影响角质形成细胞S100A8的表达而参与银屑病的病理生理过程?本课题以体外培养的永生化人角质形成细胞HaCaT细胞系为对象,通过实时定量PCR的方法研究钙泊三醇对细胞内S100A8蛋白表达的影响。 二.研究方法 (1) HaCaT细胞培养：使用含10%FBS及抗生素的MEM-EBSS培养基常规体外培养HaCaT细胞并传代。 (2) TNF-α与钙泊三醇对HaCaT细胞的干预：最后一次传代后细胞融合达80-90%时分为四组,空白对照组不加入任何药物干预,TNF-α组加入100ng/ml TNF-α,钙泊三醇组加入10弓M～10-9M浓度梯度的钙泊三醇,钙泊三醇+TNF-α组在100ng/ml TNF-α的基础上再加入10-5M～10-9M钙泊三醇,上述细胞共同孵育24h。 (3) HaCaT细胞内S100A8表达水平检测：细胞成分提取总RNA,反转录为cDNA,采用RT-PCR方法扩增目的基因S100A8及内参β-actin片段并行1%琼脂糖凝胶电泳；使用同样的cDNA及引物通过实时定量PCR的方法扩目的基因S100A8及内参β-actin片段,用2“△C‘法计算各样本S100A8相对表达量,并用单因素方差分析的统计学方法比较各组间S100A8表达的差异。 三.研究结果 (1)S100A8扩增产物为长度250bp左右的单一片段,β-actin扩增产物为长度130bp左右的单一片段； (2)100ng/ml TNF-α处理体外培养的HaCaT细胞24h后,S100A8表达较空白对照上调19.62倍(P0.01)； (3)10-7M、10-8M钙泊三醇处理细胞24h后,S100A8表达分别较空白对照上调5.029、2.848倍(P0.01)； (4)10-5M、10-6M及10-9M钙泊三醇处理细胞24h后,S100A8表达较空白对照无明显变化(P0.05)； (5)10-5M钙泊三醇与100ng/ml TNF-α共同处理体外培养的HaCaT细胞24h后,S100A8表达下调为单独使用TNF-α时的0.5951倍(P0.05)： (6)10-7M钙泊三醇与100ng/ml TNF-α共同处理细胞24h后,S100A8表达较单独使用TNF-α时上调1.873倍(P0.01)； (7)10-6M、10-8M及10-9M钙泊三醇与100ng/ml TNF-α共同处理细胞24h后,S100A8表达较单独使用TNF-α无明显变化(P0.05)。 四.结论 (1)TNF-α可以诱导体外培养的HaCaT细胞内高度表达S100A8,证实其可以与IL-1、IL-8、IL-17等炎症因子一起,通过刺激角质形成细胞高度表达S100A8,影响角质细胞增殖与分化,加重皮肤炎症反应,导致银屑病发病。 (2)钙泊三醇可能通过影响S100A8表达双向调节角质形成细胞的增殖：高浓度(约10-5M)钙泊三醇下调S100A8表达,发挥抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,并且可以打破S100A8与TNF-α等炎症因子的相互作用,减轻皮肤炎症反应,治疗银屑病皮损；低浓度(约10-7～108M)钙泊三醇上调S100A8表达,主要发挥促进细胞增殖的作用。
【关键词】：银屑病 角质形成细胞 钙泊三醇 S100A8 基因表达
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-10
• 引言10
• 材料与方法10-19
• 一.实验材料、试剂及仪器10-12
• 二.实验方法12-19
• 实验结果19-29
• 讨论29-36
• 结论36-37
• 中英文缩略词表37-38
• 参考文献38-41
• 综述1：维生素D及其类似物在银屑病中对角质形成细胞的影响41-48
• 参考文献45-48
• 综述2：IL-22在银屑病发病过程中的作用及相关治疗学进展48-54
• 参考文献52-54
• 作者基本情况54-55
• 致谢55-56

【参考文献】

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1 Benoit S.;Toksoy A.;Ahlmann M. ;M. Goebeler;李晓莉;;血清钙结合S100蛋白A8和A9的水平升高可以反映银屑病角质形成细胞的异常分化和疾病的活动性[J];世界核心医学期刊文摘(皮肤病学分册);2006年09期

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本文编号：562418