银屑病皮肤间充质干细胞生物学特性及mRNA差异表达的研究

发布时间：2017-07-26 07:22

  本文关键词：银屑病皮肤间充质干细胞生物学特性及mRNA差异表达的研究

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【摘要】：目的：研究银屑病皮肤间充质干细胞(skin-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)生物学特性,进一步分析银屑病皮肤间充质干细胞基因表达谱,了解银屑病患者皮损微环境中SMSCs变化,为SMSCs参与银屑病发病提供理论依据。 方法：应用酶消化法分离培养银屑病组与正常对照组皮肤间充质干细胞,并传代、扩增,收集第3代SMSCs及其培养上清液,倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞技术检测细胞免疫表型,分别用成脂、成骨、成软骨诱导体系鉴定细胞多系分化能力,细胞计数法绘制第3代细胞生长增殖曲线,ELISA法检测细胞培养上清液中EGF, TGF-β1浓度。应用基因芯片技术对其mRNA表达谱进行差异基因筛选。RT-PCR法对银屑病SMSCs部分差异表达基因进行验证分析。 结果：①细胞形态学特性：倒置相差显微镜下观察银屑病组与正常对照组细胞形态均存在异质性。②细胞表面标志物测定：流式细胞仪检测第3代培养细胞表面抗原CD29、CD44、CD73、CD90及CD105呈高表达,CD34.CD45及HLA-DR呈低表达。③细胞多向分化潜能测定：第3代培养细胞成脂、成骨、成软骨诱导培养14d,分别用油红O、茜素红S、甲苯胺蓝染色鉴定脂肪细胞、骨细胞及软骨细胞,结果均为阳性。④细胞增殖能力检测：细胞生长增殖曲线显示银屑病组第3代细胞增殖速度快于正常对照组。⑤分泌细胞因子(表皮生长因子EGF、转化生长因子-β1TGF-β1)水平测定：ELISA试剂盒检测到银屑病组SMSCs分泌EGF水平高于对照组(P0.05),分泌TGF-β1水平低于对照组(P0.05)。⑥基因谱差异表达分析：银屑病组与正常对照组SMSCs基因表达谱显著不同,共筛选出1927个差异表达基因(1090个基因表达呈增高趋势,837个基因呈降低趋势)；其中银屑病组UHRF1的mRNA水平呈高表达状态(P0.05)。结论：①本实验建立了稳定的银屑病组SMSCs体外分离培养鉴定方法,两组SMSCs均存在异质性；②银屑病组SMSCs生物学活性存在异常；③银屑病组SMSCs差异表达基因分析显示UHRF1的mRNA水平呈高表达。提示表达上调的UHRF1可能与银屑病SMSCs生物学特性异常密切相关。
【关键词】：银屑病 SMSCs 异质性 表型遗传修饰 UHRF1
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略词表9-10
• 前言10-12
• 第一章 材料与方法12-20
• 1.1 标本来源12
• 1.2 主要试剂12-13
• 1.3 主要仪器设备13-14
• 1.4 主要溶液配制14-15
• 1.5 实验方法15-19
• 1.6 统计处理19-20
• 第二章 实验结果20-23
• 2.1 体外培养SMSCs的形态学特征20
• 2.2 SMSCs表面标志物鉴定结果20
• 2.3 SMSCs多向分化潜能鉴定结果20-21
• 2.4 SMSCs生长增殖能力检测结果21
• 2.5 SMSCs分泌细胞因子水平测定21-22
• 2.6 SMSCs差异表达基因筛选22
• 2.7 UHRF1 mRNA在两组SMSCs中的表达22-23
• 第三章 讨论23-27
• 第四章 结论27-28
• 附图28-32
• 参考文献32-37
• 综述37-43
• 参考文献41-43
• 攻读学位期间发表论文情况43-44
• 致谢44-45
• 个人简历45

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 孙建方;银屑病免疫学发病机制研究进展[J];青岛大学医学院学报;2001年01期

2 付国,吕昌龙;p16和p15基因缺失与白血病[J];国外医学(肿瘤学分册);1997年01期

3 李新莉;朱然;朱巍;樊赛军;;人UHRF1基因对乳腺肿瘤细胞BT-549生长的影响[J];苏州大学学报(医学版);2008年03期

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本文编号：575260