NTSR1拮抗剂SR48692对黑色素瘤细胞增殖、凋亡的影响

发布时间：2017-08-02 04:16

  本文关键词：NTSR1拮抗剂SR48692对黑色素瘤细胞增殖、凋亡的影响

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【摘要】：目的：恶性黑色素瘤(malignant melanoma，MM)是起源于神经嵴黑色素细胞的高度恶性肿瘤，易转移，预后差。近年来，我国恶性黑色素瘤发病率迅速增长。多数早期患者能够通过手术得到治愈，但对于中晚期患者，标准化疗效果欠佳，因此探索高效低毒的新方法尤为需要。神经降压素(neurotensin,NT)是由13个氨基酸构成的单链多肽,主要通过神经内分泌和激素作用调节胃肠道消化功能,近些年研究证明NT能促进部分肿瘤细胞的增殖。神经降压素受体1（NT receptor subtype1，NTSR1）是与G蛋白偶联的NT的高亲和力受体，通过与NT特异性结合介导NT的多种生物学作用。有研究发现NT和NTSR1在部分肿瘤组织和肿瘤细胞中的表达显著高于正常组织，提示其在肿瘤的发生发展中起了重要作用。研究证明NTSR1竞争性拮抗剂SR48692可特异性阻断NT与NTSR1的结合，进而抑制NT的促肿瘤生长作用，因此NT/NTSR1可能成为新的肿瘤诊断指标和治疗靶点，SR48692有望成为新型肿瘤靶向治疗药物。本研究检测NTSR1在A375黑色素瘤细胞中的表达情况并探讨其表达意义；观察SR48692对人A375恶性黑色素瘤细胞增殖、周期、凋亡的影响，探索SR48692对软琼脂克隆形成和荷瘤小鼠体内肿瘤生长的抑制情况，为黑色素瘤寻找新的诊断指标和有效治疗药物。 方法： 1应用RT-PCR、Western blot和NTSR1免疫荧光检测A375黑色素瘤细胞中NTSR1的表达情况； 2采用细胞计数法、MTT（四甲基偶氮唑蓝）比色法检测不同浓度的SR48692（5μmol/L、10μmol/L）在24h、48h、72h、96h四个时间点对人黑色素瘤细胞增殖抑制作用，同时应用BrdU免疫荧光对SR48692抑制A375细胞增殖情况进行分析； 3应用PI单染流式细胞分析检测SR48692对细胞周期的影响；通过Annexin V-FITC/PI双染流式细胞分析和Hoechst33258染色验证SR48692是否能诱导黑色素瘤细胞凋亡; 4软琼脂克隆形成分析和小鼠体内成瘤实验验证SR48692是否能抑制人A375黑色素瘤细胞成瘤。 结果： 1通过RT-PCR、Western blot和NTSR1免疫荧光染色方法均证实NTSR1在人A375黑色素瘤细胞系中显著表达。 2细胞计数和MTT结果均显示SR48692能抑制A375细胞增殖，呈现明显的浓度（5μmol/L、10μmol/L）依赖效应关系；BrdU免疫荧光染色进一步证实，与对照组（26.07±2.59%）相比，SR48692处理组BrdU阳性细胞百分比显著降低（7.55±2.76%，P=0.000）。 3PI单染流式细胞分析显示：与对照组相比，SR48692处理组细胞周期S期和G2/M期比例显著增加，而G0/G1期细胞所占比例显著降低。通过细胞形态学观察、Hoechst33258染色发现SR48692处理组出现明显的凋亡形态改变，PI单染流式细胞分析显示SR48692处理组呈现明显的凋亡峰；并且Annexin V-FITC/PI双染流式细胞分析显示与对照相比(7.35±0.64%)，SR48692处理组凋亡细胞百分比(63.24±1.26%，P=0.000)显著增加。 4软琼脂克隆形成实验显示与对照组（55.67±9.01）相比，SR48692处理组克隆形成数显著降低(24.33±5.86，P=0.005）；黑色素瘤细胞体内异种移植NOD/SCID小鼠模型的研究结果显示SR48692治疗组的肿瘤体积和平均瘤重（0.117+0.023g）显著低于对照组(0.243+0.022g，，P0.05)。 结论：本研究发现在黑色素瘤细胞系中NTSR1显著表达，表明NT/NTSR1通路在A375黑色素瘤细胞系被激活.本实验通过体内外研究证明SR48692可以通过诱导A375细胞凋亡及S期、G2/M期阻滞显著抑制细胞增殖,同时抑制细胞克隆形成及小鼠体内成瘤。基于SR48692对黑色素瘤细胞如此显著的抑制作用，SR48692是一种新的很有潜力的靶向治疗黑色素瘤的候选药物。
【关键词】：恶性黑色素瘤 神经降压素 神经降压素受体1 SR48692 细胞增殖 凋亡
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-10
• 材料与方法10-21
• 结果21-24
• 附图24-33
• 附表33-35
• 讨论35-37
• 结论37
• 参考文献37-40
• 综述 恶性黑色素瘤内科治疗研究进展40-49
• 参考文献45-49
• 致谢49-50
• 个人简历50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 郭军;;恶性黑色素瘤治疗的新进展[J];临床肿瘤学杂志;2007年12期

2 崔传亮;迟志宏;袁香庆;斯璐;盛锡楠;郭军;;重组人血管内皮抑制素联合化疗一线治疗晚期黑色素瘤的Ⅱ期临床研究[J];临床肿瘤学杂志;2009年01期

本文编号：607588