负载顺铂金纳米粒子抗恶性黑素瘤的体内外效应

发布时间：2017-08-12 04:28

  本文关键词：负载顺铂金纳米粒子抗恶性黑素瘤的体内外效应

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【摘要】：恶性黑素瘤起源于黑素细胞,是一种恶性度极高的皮肤肿瘤。转移黑素瘤患者的平均存活时间只有6-10个月,10年生存率不到10%。治疗转移性黑素瘤的方法有化疗、放疗、免疫治疗和靶向治疗等,但目前的效果不理想,主要原因是药物毒副作用大、药物难以到达肿瘤部位和耐药性,疗效不显著。顺铂(cisplatin)在上世纪70年代就被发现可以抑制肿瘤细胞的生长,现在广泛应用于晚期肿瘤包括黑素瘤的治疗,但副作用很大。众所周知,肿瘤组织中存在“增强渗透和保留(EPR)效应”和酸性环境。金纳米粒子(AuNP)可作为小分子药物的运载载体粒子,使抗癌药物到达特定的肿瘤部位发挥作用；由于EPR效应,负载药物的金纳米粒子可以在肿瘤内进行选择性积累,提高药物的治疗效果。同时,肿瘤酸性微环境也为药物的可调控释放提供了前提基础,减少药物毒副作用。基于上述优势,我们课题组设计制备出具有pH敏感性的、负载顺铂的金纳米粒子,体内外观察该纳米粒子治疗恶性黑素瘤的效果。 目的：设计制备出具有pH敏感性的、负载顺铂的金纳米粒子,探讨其在体外实验中对人恶性黑素瘤M14细胞的杀伤作用,以及在体内实验中对黑素瘤裸鼠移植瘤的抑制效应。 方法：1.制备Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子：用种子生长法合成金纳米粒子,并将其PNIPAm-PEG化,成功链接顺铂,合成Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子。通过透射电镜(TEM)、紫外分光光度计、电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)等表征了金纳米粒子(AuNP)和Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子的尺寸和形态、吸收光谱及检测了Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子中顺铂的浓度； 2.体外实验：先将少量异硫氰酸荧光素(FITC)荧光探针偶联到纳米粒子表面的PNIPAm末端,用荧光显微镜在体外观察黑素瘤细胞(M14)摄取Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子的情况；通过TEM进一步观察Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子在M14细胞的胞内分布；并用MTT检测了Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子对M14细胞的毒性作用： 3.体内实验：建立人黑素瘤裸鼠移植瘤模型；通过从移植瘤内注射Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子20天,记录移植瘤的生长过程,测量移植瘤的体积、重量,在此基础上得到裸鼠的生存曲线和监测裸鼠体重；观察不同治疗组裸鼠的主要器官和移植瘤组织学改变；通过TEM观察Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子在移植瘤细胞内的分布。 结果：1.AuNP和Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子分散性好,AuNP直径为8.0±0.8nm, Au-PNIPAm-PEG-cisplatin中顺铂的浓度为100.55μM； 2. Au-PNIPAm-PEG-cisplatin进入M14细胞后,主要分布在胞浆、胞内体或溶酶体；与M14细胞作用48h和72h时,Au-PNIPAm-PEG-cisplatin的1C50是游离顺铂的1.7倍和1.5倍,未载顺铂的Au-PNIPAm-PEG对M14细胞没有毒性； 3. Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子组和游离顺铂抑瘤率分别为76.29%和66.41%；Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子组荷瘤裸鼠存活时间长于生理盐水组和无顺铂纳米粒子组；Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子组的病理组织显示移植的黑素瘤无转移；Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子主要分布于移植瘤细胞的胞内体。 结论：1. Au-PNIPAm-PEG-cisplatin能成功携带顺铂； 2. Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子比游离顺铂更能抑制M14细胞的生长； 3. Au-PNIPAm-PEG-cisplatin纳米粒子能抑制黑素瘤生长和转移,延长黑素瘤荷瘤裸鼠的生存时间。
【关键词】：恶性黑素瘤 顺铂 金纳米 pH敏感性
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 中英文单词对照6-9
• 中文摘要9-11
• Abstract11-14
• 前言14-19
• 参考文献16-19
• 第一部分 负载顺铂金纳米粒子的制备及表征19-27
• 主要仪器和试剂19-20
• 实验方法20-22
• 结果22-24
• 讨论24-25
• 小结25
• 参考文献25-27
• 第二部分 负载顺铂金纳米粒子作用于恶性黑素瘤M14细胞的体外研究27-45
• 主要仪器和试剂27-28
• 实验方法28-34
• 结果34-40
• 讨论40-42
• 小结42-43
• 参考文献43-45
• 第三部分 负载顺铂金纳米粒子抗恶性黑素瘤的体内研究45-68
• 主要仪器和试剂45
• 实验方法45-49
• 结果49-63
• 讨论63-66
• 小结66-67
• 参考文献67-68
• 全文总结68-70
• 综述 纳米技术在恶性黑素瘤治疗中的应用70-93
• 参考文献84-93
• 致谢93-94
• 攻读学位期间发表论文目录94

【参考文献】

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1 丛林海;金纳米链及Anti-EGFR/Au共轭物近红外热疗对人喉癌Hep-2细胞凋亡作用的实验研究[D];昆明医学院;2011年

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本文编号：659777