卤米松与卡泊三醇对HaCaT细胞增殖、GRα及VDR表达的影响

发布时间：2017-08-14 00:01

  本文关键词：卤米松与卡泊三醇对HaCaT细胞增殖、GRα及VDR表达的影响

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【摘要】：背景银屑病是一种以红斑、鳞屑为主要临床表现的慢性、复发性、炎症性皮肤病,以表皮细胞过度增殖、异常分化为其病理特征。外用疗法为治疗银屑病的主要手段之一,其中糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)和维生素D3衍生物(Vitamin D 3 analog)是治疗该病的一线外用药物。糖皮质激素主要通过与细胞中其相应受体即糖皮质激素受体α(Glucocorticoid receptorα,GRα)结合而发挥效应,而维生素D3衍生物则与细胞中其相应受体即维生素D受体(Vitamin D receptor,VDR)相结合而发挥效应。国内外临床观察发现,糖皮质激素联合维生素D3衍生物外用治疗银屑病的疗效明显优于两药单用。实验研究曾发现,地塞米松可上调小鼠鳞状细胞癌癌细胞中VDR的表达。上述研究发现提示,糖皮质激素对VDR表达可能存在潜在调节效应。鉴于GRα和VDR均属于核受体超家族成员,两者之间可能存在着一定程度的相互影响,那么当外用激素与维生素D3衍生物联合治疗银屑病时,糖皮质激素对维生素D3衍生物治疗效应是否可能产生影响?同样维生素D3衍生物是否会对糖皮质激素的治疗效应产生影响?由此引发我们对外用激素的代表性药物之一卤米松与维生素D3衍生物的代表性药物卡泊三醇对角质形成细胞GRα和VDR表达影响的关注。目的观察卤米松、卡泊三醇对永生化人皮肤角质形成细胞Ha Ca T细胞增殖、GRα及VDR表达的影响,以探讨糖皮质激素与维生素D3衍生物治疗效应的相互潜在影响,旨在加深对糖皮质激素及维生素D3衍生物联用治疗银屑病效应相关机制的理解,为临床治疗提供实验及理论依据。方法1.采用CCK8法检测不同浓度及不同时相点卤米松、卡泊三醇单用及联用下,Ha Ca T细胞的增殖变化。2.采用反转录-实时荧光定量PCR,观察不同浓度及不同时相点卤米松、卡泊三醇作用下,Ha Ca T细胞中GRα、VDR m RNA的表达情况。3.采用蛋白印迹法,观察不同浓度及不同时相点卤米松、卡泊三醇作用下,Ha Ca T细胞GRα、VDR蛋白质的表达情况。结果1.CCK8法检测显示,与对照组相比,随着卤米松与卡泊三醇浓度升高,对Ha Ca T细胞的增殖抑制作用越强,在24h时,抑制作用最大,其中采用10~(-5)mol/L卤米松干预卡泊三醇后,卤米松可增强卡泊三醇对Ha Ca T细胞增殖的抑制作用。2.反转录-实时荧光定量PCR和蛋白印迹法结果表明,不同浓度卤米松作用Ha Ca T细胞24h后,GRαm RNA和蛋白表达上调,呈剂量依赖性,而作用48h后,GRαm RNA表达无明显变化,GRα蛋白表达下调;不同浓度卤米松作用Ha Ca T细胞24h、48h后,VDR m RNA和蛋白表达上调,并呈剂量依赖性。3.反转录-实时荧光定量PCR和蛋白印迹法结果显示,不同浓度卡泊三醇作用Ha Ca T细胞24h、48h后,VDR m RNA和蛋白表达上调,其中蛋白表达呈剂量依赖性。不同浓度卡泊三醇作用Ha Ca T细胞24h后,GRαm RNA和蛋白表达上调,其中蛋白表达呈剂量依赖性,而作用48h后,GRαm RNA和蛋白表达无明显变化。结论1.卤米松可增强卡泊三醇对Ha Ca T细胞增殖的抑制作用,提示卤米松与卡泊三醇在抑制Ha Ca T细胞增殖方面具有协同效应。2.卤米松作用48小时后可下调Ha Ca T细胞中GRα表达,显示出配体依赖的受体下调效应,这可能部分解释“激素耐受”现象。3.卤米松上调Ha Ca T细胞VDR的表达,可能有助于提高Ha Ca T细胞对维生素D3衍生物作用的反应性。这提示外用激素的应用在临床上有可能提高维生素D3衍生物对银屑病的治疗效应。4.卡泊三醇可上调Ha Ca T细胞VDR的表达,未发现卡泊三醇引发配体依赖的受体下调效应,这在临床上可能有助于维生素D3衍生物更好地发挥治疗效应。5.卡泊三醇虽然在24小时可上调Ha Ca T细胞GRα表达,但作用48h后Ha Ca T细胞GRαm RNA和蛋白表达并无明显变化。这提示卡泊三醇上调Ha Ca T细胞GRα表达的效应持续时间有限,卡泊三醇的持续作用(48h)对Ha Ca T细胞GRα表达并无显着影响。
【关键词】：糖皮质激素 维生素D3衍生物 卤米松 卡泊三醇 糖皮质激素受体 维生素D受体 角质形成细胞
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-24
• 结果24-43
• 讨论43-46
• 全文总结46-47
• 参考文献47-50
• 文献综述 维生素D3衍生物在皮肤科应用的作用机制50-60
• 参考文献56-60
• 攻读学位期间发表的论文60-61
• 致谢61

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本文编号：669660