湿疹患者外周血中IL-21和Bcl-6的表达和临床相关性研究

发布时间：2017-08-19 11:17

  本文关键词：湿疹患者外周血中IL-21和Bcl-6的表达和临床相关性研究

  更多相关文章： 湿疹 白细胞介素-21 B细胞淋巴瘤-6 Tfh细胞 实时荧光定量聚合酶链式应 EASI评分

【摘要】：目的:湿疹是皮损形态多样性的慢性炎症性皮肤病,目前研究认为,湿疹是在复杂的内外环境因素和多基因遗传背景的共同影响下,发生T细胞亚群间的失衡及其相关功能因子的失调而导致的变态反应性疾病。查阅国内外文献发现,滤泡性辅助性T细胞(T Follicular Helper Cells,Tfh)在T细胞介导的免疫疾病中扮演着重要作用,Tfh细胞的主要效应因子是白介素-21(interleukin-21,IL-21),特异性转录因子为B细胞淋巴瘤-6(B cell lymphoma,Bcl-6)。本课题通过研究Tfh细胞的主要效应因子IL-21和特异性转录因子Bcl-6在湿疹患者和正常人外周血中的表达及差异,初步探讨IL-21和Bcl-6在湿疹发病、发展和转归中的相关免疫机制。本实验初步探讨:1.IL-21m RNA和Bcl-6m RNA在湿疹患者和正常人外周血中的表达水平以及两者之间的表达差异;2.不同性别湿疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA表达水平的差异;3.IL-21m RNA和Bcl-6m RNA在不同分型湿疹患者外周血中的表达水平及其间的差异;4.在治疗2周和4周后,湿疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表达水平及差异;5.湿疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA表达水平与湿疹皮损面积及严重度评分(Eczema Area And Severity Index,EASI)、实验室指标的相关性;6.IL-21、Bcl-6之间的相关性,探讨这两个细胞因子在湿疹患者发病中的作用;方法:收集来自2014年月2月至2015年11月期间就诊于天津市人民医院皮肤科门诊的60例湿疹患者为实验组;天津医科大学总医院同期健康体检者40例为对照组。采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法,检测40例健康者和60例湿疹患者治疗前、治疗2周以及治疗4周后外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表达量并进行相关统计学分析。遵照EASI评分标准对湿疹患者进行湿疹面积及严重度指数评分。利用统计学软件SPSS17.0对临床收集数据和实验所得的数据进行相关统计学处理和分析,以P0.05有统计学意义。结果:1.湿疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表达水平均明显低于健康对照组(IL-21的"緾T值分别为6.91±1.12 vs 1.59±0.17;Bcl-6的"緾T值分别为9.95±1.57 vs 3.40±0.56,均P0.05)。2.不同性别的湿疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA表达均无统计学差异(IL-21"緾T值男vs女:6.99±1.08 vs 6.79±1.17;Bcl-6"緾T值男vs女10.03±1.55 vs 9.84±1.63;均P0.05)。3.不同分型湿疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表达水平差异均有统计学意义,急性湿疹IL-21m RNA、Bcl-6m RNA表达水平低于亚急性湿疹和慢性湿疹,亚急性湿疹IL-21m RNA、Bcl-6m RNA表达水平低于慢性湿疹(急性湿疹vs亚急性湿疹vs慢性湿疹IL-21"緾T值分别为8.25±0.34 vs 6.71±0.28 vs5.77±0.59;Bcl-6"緾T值分别为11.63±0.37 vs 10.19±0.56 vs 8.04±0.59,均P0.05)。4.经综合治疗2周后,湿疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表达水平比治疗前升高,且差异均有统计学意义(IL-21的"緾T值分别为5.18±1.37、6.86±1.21;Bcl-6的"緾T值分别为8.10±1.51、9.76±1.66;均P0.05);治疗4周后,湿疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表达比治疗2周后和治疗前均升高,且差异均有统计学意义(IL-21的"緾T值分别为2.80±0.55 vs5.00±1.31 vs 6.73±1.13;Bcl-6的"緾T值分别为5.13±1.00 vs 7.93±1.53 vs9.60±1.60;均P0.05)。5.湿疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表达水平与EASI评分及嗜酸性粒细胞均成负相关,且差异均有统计学意义(均P0.001);IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表达与患者年龄、白细胞计数之间无明显相关性(均P0.05)。6.湿疹患者外周血中IL-21mRNA和Bcl-6mRNA的表达呈正相关,且有统计学意义(P=0.001)。结论:1.湿疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表达水平均降低,并且与EASI评分呈负相关,表明IL-21和Bcl-6两个细胞因子可能参与了湿疹的发病过程;2.经综合治疗2周后和4周后,湿疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表达水平均比治疗前升高,且差异均有统计学意义,表明可以通过调控IL-21和Bcl-6两个细胞因子的表达水平,对治疗湿疹起到一定的作用。
【关键词】：湿疹 白细胞介素-21 B细胞淋巴瘤-6 Tfh细胞 实时荧光定量聚合酶链式应 EASI评分
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.23
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语11-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 对象和方法15-28
• 1.1 实验组病例来源15
• 1.2 健康对照组15
• 1.3 诊断和分期标准15
• 1.4 病例排除标准15-17
• 1.5 湿疹患者治疗方案17
• 1.6 湿疹面积及严重度评分标准17-18
• 1.7 主要试剂18-19
• 1.8 实验器具与材料19
• 1.9 试剂的配制19-21
• 1.10 实验器具的处理和准备21
• 1.11 实验仪器21-22
• 1.12 实验方法和步骤22-27
• 1.12.1 超净台处理22
• 1.12.2 实验所需的样本采集以及相关处理22
• 1.12.3 全血总RNA的提取22-24
• 1.12.4 总RNA的测定24
• 1.12.5 逆转录反应24-25
• 1.12.6 SYBR Green I实时荧光定量PCR25-26
• 1.12.7 PCR产物凝胶电泳26-27
• 1.13 临床资料及实验室检查27
• 1.14 统计学方法27-28
• 实验结果28-35
• 2.1 总RNA纯度的检测28
• 2.2 总RNA完整性的检测28
• 2.3 基因的相对定量方法及分析28
• 2.4 GAPDH、IL-21、Bcl-6 扩增产物鉴定28-32
• 2.4.1 GAPDH、IL-21、Bcl-6 的PCR产物28
• 2.4.2 检测扩增产物的特异性28-32
• 2.5 湿疹患者IL-21、Bcl-6 相对表达量的分析及与部分临床指标的相关性分析（表 10-表 15）32-35
• 讨论35-46
• 3.1 遗传因素和外界环境因素与湿疹发病机制的相关研究35-36
• 3.2 CD4+T细胞亚群功能失衡与湿疹发病机制的相关研究36-37
• 3.3 Tfh细胞的相关功能分子IL-21 和Bcl-6 与湿疹37-46
• 3.3.1 IL-21 在湿疹中的作用机制38-41
• 3.3.2 Bcl-6 在湿疹中的作用机制41-43
• 3.3.3 IL-21、Bcl-6 与湿疹43-46
• 结论46-47
• 参考文献47-54
• 发表论文和参加科研情况说明54-55
• 综述 Tfh细胞在相关疾病中的研究进展55-72
• 综述参考文献65-72
• 致谢72-74
• 个人简历74

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本文编号：700406