成纤维细胞生长因子对银屑病皮肤间充质干细胞影响的研究

发布时间：2017-08-19 21:29

  本文关键词：成纤维细胞生长因子对银屑病皮肤间充质干细胞影响的研究

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【摘要】：[目的] 通过研究成纤维细胞生长因子(bFGF)对银屑病患者皮肤间充质干细胞(mesenchymal stem cells, SMSCs)在体外培养生长的影响,明确其bFGF在SMSCs生长增殖中发挥的重要作用,同时通过对银屑病患者皮肤MSCs体外生物学活性的鉴定及其细胞因子分泌水平的测定,为bFGF在参与银屑病皮肤微环境改变提供其理论基础。 [方法] ①分离、培养20例银屑病患者皮损与20例健康人皮肤的单个核细胞,②用流式细胞仪检测其细胞表面相关标记物包括CD34、CD45、CD29、CD105、CD73、CD90及HLA-DR③经相应诱导剂诱导细胞,并鉴定多向分化的细胞④ELISA法检测第3代皮肤单个核细胞培养上清液细胞因子水平⑤采用bFGF的浓度为10g/L,通过添加(bFGF)这个对细胞生长增殖有影响作用的细胞因子,且依据细胞培养的天数,在规定时间内利用细胞计数仪对SMSCs进行计数,绘制bFGF作用下的细胞生长曲线图,观察bFGF对MSCs细胞生长增殖的影响⑥依据Pearson相关分析,对其银屑病皮损程度和面积大小进行PASI评分,从而探讨细胞因子bFGF分泌在银屑病发病中的重要作用。[结果] ①经分离、培养MSCs,待细胞贴壁达90%以上,传至第3代,倒置显微镜下观察,银屑病组和健康对照组MSCs细胞形态相似；②银屑病组与健康对照组皮肤MSCs,细胞表面抗原均表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105,而CD34、CD45及HLA-DR表达阴性,说明所培养的SMMSCs纯度较高；③银屑病组与健康对照组皮肤MSCs多向分化能力相似,均可向脂肪细胞和成骨细胞、软骨细胞分化④通过绘制细胞生长曲线,发现bFGF实验组细胞生长增殖明显快于bFGF对照组,；⑤银屑病患者皮损MSCs上清液中bFGF升高，，IL-6、HGF显著降低(P0.05),而两组VEGF比较无统计学差异(P0.05)；银屑病患者SMSCs细胞因子水平与PASI评分无相关性。[结论] ①建立并分离、培养、鉴定了SMSCs,为培养SMSCs提供了正确、有效的方法,明确了SMSCs的生物学活性；2.在皮肤间充质干细胞SMSCs的原代生长增殖中,成纤维细胞生长因子(bFGF)具有明显的促生长作用；3.银屑病患者皮损SMSCs细胞因子分泌水平异常,皮损SMSCs分泌的碱性成纤维细胞因子(bFGF),可能间接地促进了银屑病皮肤微环境的炎症反应,从而促进了银屑病的发生和发展。
【关键词】：银屑病 SMSCs培养鉴定 MSC生长增殖 bFGF
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 缩略词表9-10
• 前言10-12
• 第一章 材料与方法12-18
• 1. 标本来源12
• 2. 主要试剂12-13
• 3. 主要仪器设备13
• 4. 主要试剂配制13-15
• 5. 实验方法15-17
• 6. 统计处理17-18
• 第二章 实验结果18-20
• 1. S-MSCs培养形态学的观察18
• 1.1. bFGF实验组SMSCs生长18
• 1.2. bFGF对照组SMSCs生长18
• 1.3. 传代后两组SMSCs生长比较18
• 2 SMSCs表面标记物鉴定结果18
• 3 SMSCs多项诱导分化潜能鉴定结果18-19
• 4. bFGF作用下SMSCs生长增殖能力检测结果19
• 5. ELISA法检测细胞培养上清液中细胞因子结果19
• 6. Pearson相关分析患者细胞因子水平与病变严重程度19-20
• 第三章 讨论20-22
• 第四章 结论22-23
• 参考文献23-25
• 附图25-30
• 文献综述30-36
• 参考文献34-36
• 个人简历36-37
• 致谢37

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 张友灿,李春阳;几种血管活性因子与银屑病[J];国外医学.皮肤性病学分册;2005年02期

2 白秉学,徐东刚,范明;碱性成纤维细胞生长因子的研究进展[J];国外医学.遗传学分册;2004年04期

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4 潘智慧;王丽;刘瑞风;张永翠;李欣;王荣;刘小民;张开明;;皮肤间充质干细胞的原代培养[J];中国皮肤性病学杂志;2012年02期

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本文编号：703096