大鼠骨髓间充质干细胞向恶性黑色素瘤组织归巢能力的探讨

发布时间：2017-08-23 21:06

  本文关键词：大鼠骨髓间充质干细胞向恶性黑色素瘤组织归巢能力的探讨

  更多相关文章： 间充质干细胞 黑色素瘤 归巢 肺部毛细血管阻滞 静脉移植

【摘要】：目的：恶性黑色素瘤是一种高度恶性的肿瘤，其发病率在皮肤科肿瘤中居于第三位，且呈逐年上升的态势。恶性黑色素瘤的恶性程度较高，且多发生转移，预后较差。患者的死亡率会随着肿瘤侵袭的深度而增加。目前除了及早发现并行手术切除外，并无其他有效治疗手段。但目前许多肿瘤在发现时多已发生转移，所以单纯的手术切除很难达到根治的目的。而以放、化疗为辅助手段的治疗对恶性黑色素瘤收效甚微。所以寻求一种高效、安全的辅助治疗手段正成为人类迫切的需求。近年来随着对干细胞研究的不断深入，间充质干细胞逐渐走入了人们的视野。间充质干细胞因其具有组织来源丰富，易于体外扩增并能向损伤以及肿瘤组织迁移的能力等特性[1]，所以间充质干细胞是一种较为理想的载体，可以携带抗肿瘤药物或者抑癌基因到达肿瘤组织，以实现对肿瘤的治疗作用。但间充质干细胞向肿瘤组织的归巢还受到很多因素的影响，能到达靶组织的细胞数量对于治疗的效果将起到决定性的作用。移植途径的选择是决定间充质干细胞归巢的首要因素。目前的细胞移植途径主要有静脉移植、动脉移植以及局部移植。通过静脉移植较为安全，同时也利于干细胞在体内的迁移，但是肺部毛细血管的阻滞作用成为了影响间充质干细胞向肿瘤组织归巢的首要因素[2]。本实验通过建立黑色素瘤裸鼠模型，通过静脉途径向荷瘤裸鼠以及正常裸鼠移植PKH26标记的间充质干细胞，通过计数荷瘤裸鼠肿瘤组织以及两组裸鼠肺组织切片中荧光阳性的细胞数目，从而探讨间充质干细胞向黑色素瘤组织归巢的能力，以及肺部毛细血管阻滞对其归巢的影响。进而通过本实验对以间充质干细胞为载体的对肿瘤的靶向治疗提供指导。 方法： 1以密度梯度离心法分离并纯化大鼠的骨髓间充质干细胞，并且传代培养。 2通过诱导，让所得到的间充质干细胞向成骨细胞和神经元样细胞分化，以验证其作为干细胞具有多向分化的潜能。 3黑色素瘤动物模型的制备：向裸鼠的后下肢皮下注射裸鼠黑色素瘤细胞B16，制备黑色素瘤动物模型。 4应用PKH26标记骨髓间充质干细胞，并计算标记率。 5动物实验将4周龄雌性裸鼠随机分为A、B两组每组各10只，A组通过皮下注射黑色素瘤细胞B16建立黑色素瘤裸鼠模型。2周后待A组裸鼠成瘤后通过鼠尾静脉向两组裸鼠移植PKH26标记的间充质干细胞。让裸鼠自由进食水，，观察并记录A组裸鼠的肿瘤直径以及两组裸鼠的状态。 6两周后将裸鼠全部处死，取下A组裸鼠的肿瘤组织，以及A、B两组裸鼠的肺组织，制作组织切片。荧光显微镜下计数组织切片中荧光阳性的细胞数量。 7运用统计学软件SPSS对数据进行统计分析。 结果： 1以密度梯度离心法分离纯化的细胞，可逐步得到呈长梭形放射状排列的细胞。 2通过诱导，所得到的间充质干细胞可以向成骨细胞以及神经元样细胞分化。 3经皮下注射黑色素瘤细胞的裸鼠，1周后成瘤，2周后肿瘤直径最大1cm最小0.6cm，裸鼠略显消瘦但活力正常。 4PKH26标记的间充质干细胞胞膜呈均匀的红色荧光，标记率为100%,且子代也带有荧光。PKH26标记后细胞的生长与增殖未受影响。 5间充质干细胞移植2周后两组裸鼠均存活。A组裸鼠皮下最小1.2cm，脂肪基本消失，呈恶病质状态，A组裸鼠肿瘤直径最大2.4cm，部分肿瘤组织的顶端出现不同程度的破溃。B组裸鼠未见明显异常。 6A组裸鼠肿瘤组织切片中荧光阳性的细胞数平均为为9.9个，且与A组裸鼠肿瘤组织的直径呈正相关，相关系数为0.976，（P值为0.000.05）具有统计学意义。A组裸鼠肺组织切片中荧光阳性细胞数平均为3.1个，B组肺组织切片中荧光阳性的细胞数平均为3.2个，两组数据相比在统计学上无差别（P值0.8130.05）。 结论：通过静脉移植的间充质干细胞能够在体内迁移并定植到肿瘤组织。肿瘤组织的大小与间充质干细胞归巢的数量呈正相关。通过静脉移植的间充质干细胞，由于肺部毛细血管的阻滞，部分细胞会滞留在肺部，且无论有无肿瘤的影响，滞留在肺部毛细血管的细胞数并无差别。
【关键词】：间充质干细胞 黑色素瘤 归巢 肺部毛细血管阻滞 静脉移植
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-17
• 结果17-18
• 附图18-26
• 附表26-27
• 讨论27-31
• 结论31
• 参考文献31-34
• 综述 间充质干细胞向恶性黑色素瘤组织归巢能力的探讨34-44
• 参考文献40-44
• 致谢44-45
• 个人简历45

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本文编号：727289