shRNA沉默CDK2基因对B16-F1细胞小鼠皮下移植瘤的影响

发布时间：2017-09-01 01:34

  本文关键词：shRNA沉默CDK2基因对B16-F1细胞小鼠皮下移植瘤的影响

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【摘要】：目的早期恶性黑色素瘤可以通过手术切除的方式得到缓解,发生转移的黑色素瘤由于其耐药性,预后较差。为探索治疗黑色素瘤的新方法,本研究探讨由慢病毒载体pUL介导的shRNA沉默CDK2基因对黑色素瘤细胞B16-F1皮下移植瘤生长的影响。方法于C57BL/6小鼠右侧腹股沟皮下注射B16-F1细胞建立移植瘤模型,采用癌灶多点注射的方法分为空白对照组、阴性对照组和实验组(n=5)。阴性对照组,采用癌灶多点注射的方法将携带NC-shRNA的重组慢病毒(滴度为2×108 TU/mL)导入肿瘤灶,每只小鼠200μL,隔日1次,共6次,观察18d;空白对照组,用与阴性对照组相同的方式方法向瘤体注射PBS,观察18d;实验组,采用癌灶多点注射的方法将携带CDK2-shRNA的重组慢病毒(滴度为2×108 TU/mL)导入肿瘤灶,每只小鼠200μL,隔日1次,共6次,观察18d。观察肿瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线,18d后杀鼠取瘤称瘤质量,计算肿瘤生长抑制率,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测肿瘤组织细胞中CDK2蛋白表达情况。结果 C57BL/6小鼠接种瘤细胞3d后均有肿瘤形成。治疗的第6天空白对照组、阴性对照组和实验组的肿瘤体积分别为(48.7±8.4)、(50.0±8.9)和(31.4±8.7)mm3,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,肿瘤生长速度明显降低,差异有统计学意义,F=8.879,P=0.004。空白对照组、阴性对照组和实验组的肿瘤重量分别为(0.56±0.10)、(0.55±0.11)和(0.28±0.07)g,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,肿瘤体质量明显降低,差异有统计学意义(F=13.659,P=0.001),实验组与空白对照组相比肿瘤生长抑制率为50.2%;空白对照组、阴性对照组和实验组的细胞凋亡指数分别为(7.73±1.08)%、(7.87±1.42)%和(32.27±3.62)%,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,瘤细胞凋亡指数显著升高,差异有统计学意义,F=189.748,P0.001。实验组与空白对照组和阴性对照组相比,组织细胞中CDK2蛋白的表达显著降低,差异有统计学意义(F=293.346,P0.001),实验组相对于空白对照组CDK2蛋白表达的抑制率为50.4%。结论重组慢病毒CDK2-shRNA沉默CDK2基因的表达能有效抑制B16-F1细胞移植瘤的生长,CDK2基因可能成为黑色素瘤基因治疗的有效靶点。
【作者单位】： 鹤壁职业技术学院医学院;湖北省食品药品监督检验研究院;郑州大学第一附属医院检验科;
【关键词】： 黑色素瘤 CDK 基因沉默 CBL/小鼠 移植瘤
【基金】：河南省科技计划(122300410193) 河南省高等学校青年骨干教师资助计划(2011GGJS-262)
【分类号】：R739.5
【正文快照】： 2.湖北省食品药品监督检验研究院,湖北武汉4300643.郑州大学第一附属医院检验科,河南郑州450052中华肿瘤防治杂志,2016,23(9):592-596Chin J Cancer Prev Treat,2016,23(9):592-596早期恶性黑色素瘤可以通过手术切除的方式得到缓解,一旦发生转移,临床应用各种化学药物和生物药

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本文编号：769169