VEGF与P21活化激酶1信号通路相互作用在银屑病致病机制中的研究

发布时间：2017-09-01 23:10

  本文关键词：VEGF与P21活化激酶1信号通路相互作用在银屑病致病机制中的研究

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【摘要】：第一部分 p-PAK1及VEGF在银屑病中的表达及其相关性 目的研究p-PAK1及VEGF在银屑病中的表达,并探讨p-PAK1与临床PASI及VEGF的相关性。 方法临床收集银屑病组织标本,分别记录临床PASI评分,同时选用正常皮肤标本作为对照组,采用免疫组织化学方法检测银屑病石蜡标本中p-PAK1及VEGF的表达,并用Image-pro Plus6.0进行半定量分析；运用蛋白免疫印迹方法检测银屑病新鲜组织标本中p-PAK1及VEGF的表达,并用Quantity one对蛋白表达进行半定量分析；应用Pearson相关性分析检测p-PAK1与PASI、p-PAK1与VEGF之间的相关性。 结果 1.免疫组织化学检测示p-PAK1及VEGF在银屑病皮损中的表达量即平均光密度值及平均阳性面积均明显高于正常皮肤组(p0.05)。 2.蛋白免疫印迹检测示p-PAK1及VEGF在银屑病皮损中的表达量即相对蛋白水平均明显高于正常皮肤组(p0.05)。 3. p-PAK1在银屑病中的表达量与临床PASI值之间存在明显正相关性(p0.05)。 4. p-PAK1与VEGF在银屑病皮损中的表达具有明显正相关性(p0.05)。 结论PAK1信号通路在银屑病皮损中出现过度活化现象,p-PAK1在银屑病中过量表达,p-PAK1可能参与疾病的发生和发展；PAK1信号通路可能与VEGF相互作用共同参与银屑病的疾病进程。 第二部分 PAK1信号通路调节VEGF在Hacat细胞中的表达 目的通过在Hacat角质形成细胞系中转染质粒pCMV6M-PAK1-T423E和pCMV6M-PAK1-K299R,探讨分别激活及抑制PAK1信号通路活性后对VEGF的表达量的影响。方法抽提质粒pCMV6M-PAK1-T423E和pCMV6M-PAK1-K299R后,体外转染Hacat细胞,分别于转染后18h、24h、30h采用蛋白免疫印迹方法检测p-PAK1的表达,同时运用Real-Time PCR、蛋白免疫印迹及ELISA等方法分别从mRNA水平及蛋白水平检测VEGF表达量的变化。 结果 1.质粒pCMV6M-PAK1-T423E和pCMV6M-PAK1-K299R成功转染到Hacat细胞,激活和抑制PAK1后,分别增加和降低p-PAK1的表达量(p0.05)。 2. Hacat细胞转染质粒pCMV6M-PAK1-T423E后,可从mRNA水平、蛋白水平增加VEGF的表达(p0.05)。 3. Hacat细胞转染质粒pCMV6M-PAK1-K299R后,可从mRNA水平、蛋白水平降低VEGF的表达(p0.05)。 4. pCMV6M-PAK1-T423E转染Hacat细胞后24h达到最大活性,而pCMV6M-PAK1-K299R转染Hacat细胞后30h达到最大活性。 结论PAK1信号通路调节VEGF在Hacat细胞中的表达,激活PAK1可提高VEGF的表达,而抑制PAK1可降低VEGF表达。提示PAK1信号通路可能通过调节VEGF的表达量,参与银屑病的发生及发展过程。 第三部分 VEGF激活PAK1信号通路及VEGF对Hacat细胞生物学行为的影响 目的探讨在Hacat细胞中VEGF对PAK1信号通路活性的影响,观察VEGF可否通过PAK1信号通路介导自分泌,同时观察VEGF对Hacat细胞生物学行为的影响,进一步探讨PAK1信号通路与VEGF之间的相关性。 方法用VEGF细胞因子作用于Hacat细胞后,应用蛋白免疫印迹方法检测PAK1信号通路活性的改变,同时用不同浓度Ong/ml、5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml VEGF细胞因子刺激作用细胞,运用MTT、流式细胞学方法检测其对Hacat细胞增殖及凋亡的影响。 结果VEGF作用于Hacat细胞,激活PAK1信号通路,p-PAK1相对蛋白表达水平明显升高(p0.05)：细胞因子刺激作用细胞后,可以促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,且随着VEGF浓度的增高,作用逐渐明显并呈现浓度依赖性。 结论在Hacat细胞中,VEGF激活PAK1信号通路,PAK1信号通路活化后,增加VEGF的表达,VEGF可能通过PAK1信号通路促进自身在角质形成细胞中的自分泌过程,从而进一步明确了在银屑病中PAK1信号通路过度活化与VEGF的关系,也为银屑病的治疗提供了新的思路。
【关键词】：银屑病 p-PAK1 VEGF PASI Hacat细胞 PAK1 p-PAK1 VEGF 质粒 PAK1 VEGF MTT 流式细胞学
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 缩写词及中英文对照6-9
• 中文摘要9-12
• ABSTRACT12-15
• 前言15-18
• 主要材料与试剂18-21
• 主要仪器与器材21-22
• 第一部分 P-PAK1及VEGF在银屑病中的表达及其相关性22-37
• 实验方法23-29
• 实验结果29-35
• 讨论35-37
• 第二部分 PAK1信号通路调节VEGF在HACAT细胞中的表达37-54
• 实验方法38-45
• 实验结果45-52
• 讨论52-54
• 第三部分 VEGF激活PAK1信号通路及VEGF对HACAT细胞的生物学作用54-63
• 实验方法55-58
• 实验结果58-61
• 讨论61-63
• 全文小结63-64
• 综述 银屑病发病机制的研究进展64-74
• 参考文献74-87
• 附录 在校期间所发表的文章87-88
• 致谢88-89

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本文编号：774939