寻常性银屑病皮损γδT细胞、Vγ9T细胞定量分析及IL-17A表达
本文关键词：寻常性银屑病皮损γδT细胞、Vγ9T细胞定量分析及IL-17A表达
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【摘要】：目的银屑病是临床上常见的由免疫介导的慢性炎症性皮肤疾病,其主要组织病理改变是以角质形成细胞过度增生、大量白细胞浸润和新生血管形成为特点。依据临床表现分为寻常性、关节病性、脓疱性、红皮病性四型。临床上以寻常性银屑病患者最为常见,白色鳞屑、发亮薄膜和点状出血是本病的临床特征。银屑病的发病机制尚不完全清楚。既往研究倾向认为银屑病是一种T淋巴细胞相关的自身免疫性皮肤病,辅助型T细胞-17(Th17)表达的白细胞介素-17(IL-17)与银屑病的发生、发展之间的关系越来愈密切。但在研究中Th17细胞并不能解释1L-17调节的一些早期免疫应答,随着研究的深入,发现免疫细胞7δT细胞才是重要的产生1L-17的固有细胞。目前在银屑病与7δT细胞相关性的研究多集中在银屑病鼠模型研究,大样本的银屑病患者临床研究尚未见国内外文章报道。本研究拟在寻常性银屑病患者的正常皮肤组织和患处皮损组织作对比,观察组织中CD3。。T细胞、TCR γ/δ、TCR-Vγ9及细胞因子1L-17A表达差异,用以分析7δT细胞、V79T细胞及细胞因子1L-17A在寻常性银屑病发病中的相关作用,进而探讨研究银屑病的发病机理,为临床治疗提供新的方向,不仅具有较高的学术价值而且具有广阔的应用前景。方法本实验应用免疫荧光组化方法检测寻常性银屑病患者的正常皮肤组织和患处皮损组织中7δT细胞、V79T细胞及细胞因子1L-17A的表达。分别制备其正常皮肤组织和患处皮损组织的石蜡和冰冻切片,选用PerCP/Cy5.5 anti-humanCD3和FITC anti-human TCR γ/δ, PerCP/Cy5.5 anti-human CD3和PE anti-human TCR Vγ9、FITC anti-human TCR γ/δ和APC anti-human IL-17A抗体直接法进行双染。荧光显微镜照相后通过Image-ProPlus和ImageJ软件进行细胞计数、平均荧光强度分析。最后统计数据,利用spss13.0统计软件进行结果分析。结果通过荧光显微镜观测,寻常性银屑病患者的皮损里分布着大量的CD3+。T细胞,皮损区真皮内可见到数量较多的7δT细胞、Vγ9T细胞表达,同时在健康人正常皮肤及寻常性银屑病患者的非皮损区的真皮内也可见γδT细胞、Vγ9T细胞表达。同时可见真皮中大量1L-17A浸润。γδT细胞的数量,在寻常性银屑病患者皮损区的表达显著高于非皮损区和健康人正常皮肤,p0.0001；Vγ9T细胞的数量,在寻常性银屑病患者皮损区的表达也显著高于非皮损区和健康人正常皮肤的表达,p0.0001,有统计学意义。Vγ9T细胞占CD3+T细胞的百分含量在寻常性银屑病患者皮损和非皮损区对比健康人均显著增高,p0.0001,有统计学意义。但Vγ细胞占CD3+T细胞的百分含量在寻常性银屑病患者皮损区和非皮损区两者间,p0.05,无显著性差异。γδT细胞、Vγ9T细胞表达水平与PASI评分值之间在皮损区和非皮损区统计结果均有统计学意义,p0.05,(r=0.906,r=0.987)呈正相关。患者皮损区IL-17A平均荧光强度显著高于非皮损区,差异有统计学意义(p0.0001)；患者皮损区IL-17A平均荧光强度显著高于健康人,差异有统计学意义(p0.0001)；患者IL-17A非皮损区IL-17A平均荧光强度显著高于健康人,差异有统计学意义(p0.0001)。且银屑病患者皮损区及非皮损区IL-17A平均荧光强度与PASI评分值有相关性,p0.05,有统计学意义,(r=0.821,r=0.959,r=0.996,r=0.991)且呈正相关。结论寻常性银屑病患者皮损区及非皮损区均有γδT细胞及Vγ9T细胞分布,细胞数量较多；γδT细胞及Vγ9T细胞主要聚集在银屑病患者皮肤的真皮层；皮损区γδT细胞及Vγ9T细胞数量明显高于它们在非皮损区及健康人皮肤组织中的数量；患者皮损区γδT细胞、Vγ9T细胞数量及IL-17A的表达量均与银屑病病情严重程度相关,高表达量的IL-17A会导致银屑病患者严重的皮肤损害,随着IL-17A的表达水平下降,其损害程度也相应减弱；同时,IL-17A的表达与γδT细胞及Vγ9T细胞增殖数量相关。由此推论,患者真皮内的γδT细胞及Vγ9T细胞与寻常性银屑病的发生发展,可能存在密切关系。并且,1,δT细胞,尤其是Vγ9T可能是IL-17A的主要来源。
【关键词】：银屑病 γδT细胞 Vγ9T细胞 IL-17A
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R758.63
【目录】：
- 中文摘要4-6
- Abstract6-11
- 缩略语/符号说明11-12
- 前言12-15
- 研究现状、成果12-13
- 研究目的、方法13-15
- 一、γδT细胞、Vγ9T细胞阳性对照组设立15-19
- 1.1 对象和方法15-16
- 1.1.1 实验对象15
- 1.1.2 实验材料与方法15-16
- 1.2 结果16-17
- 1.3 讨论17-18
- 1.4 小结18-19
- 二、γδT细胞、Vγ9T细胞对照组设立19-22
- 2.1 对象和方法19-20
- 2.1.1 实验对象19
- 2.1.2 实验材料与方法19-20
- 2.2 结果20-21
- 2.3 讨论21
- 2.4 小结21-22
- 三、寻常性银屑病皮肤中γδT细胞、Vγ9T细胞定量分析22-38
- 3.1 对象和方法22-25
- 3.1.1 病例来源22
- 3.1.2 实验材料与方法22-25
- 3.2 结果25-35
- 3.2.1 寻常性银屑病患者皮损区、非皮损区及正常人皮肤组织免疫荧光染色25-26
- 3.2.2 寻常性银屑病患者皮肤内γδT细胞、Vγ9T细胞水平26-27
- 3.2.3 寻常性银屑病患者皮肤内γδT细胞、Vγ9T细胞总量估算方法27-35
- 3.3 讨论35-36
- 3.4 小结36-38
- 四、寻常性银屑病患者皮肤中IL-17A表达38-46
- 4.1 对象和方法38-41
- 4.1.1 病例来源38
- 4.1.2 实验材料与方法38-41
- 4.2 结果41-44
- 4.2.1 寻常性银屑病患者皮损区、非皮损区及正常人皮肤组织IL-17A表达41-42
- 4.2.2 IL-17A平均荧光强度分析及其与PASI评分相关性分析42-44
- 4.3 讨论44-45
- 4.4 小结45-46
- 结论46-47
- 参考文献47-53
- 发表论文和参加科研情况说明53-54
- 附录54-57
- 综述57-74
- 参考文献65-74
- 致谢74
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，本文编号：803317
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