Gasdermin A3基因在小鼠皮肤上皮中对Krt6b和Frizzled4表达影响的实验研究

发布时间：2017-09-07 09:31

  本文关键词：Gasdermin A3基因在小鼠皮肤上皮中对Krt6b和Frizzled4表达影响的实验研究

  更多相关文章： Gsdma3基因 Krt6b基因 Frizzled4基因 小鼠皮肤上皮细胞

【摘要】：研究背景:皮肤是由表皮,真皮组成。皮肤与其附属器官(如毛囊、皮脂腺和汗腺)一起起到保护机体免受外界损伤、维持机体内环境平衡以及维持体温的作用。毛囊是皮肤的附属器官之一,毛囊形态建成开始于胚胎期12.5天(E12.5),待小鼠出生后,毛囊会经历生长期(anagen),退化期(catagen)和静止期(telogen)的周期性循环。多种信号通路及各种因子尤其是分化相关因子参与毛囊周期的调控,任何环节出现异常均会影响毛囊周期的正常循环。角质蛋白是重要的蛋白家族,它是皮肤,毛发,指甲的重要组成成分。Krt6b蛋白是角蛋白家族中的一员,属于二型角蛋白,该蛋白是哺乳动物表皮角质形成细胞成熟分化过程中十分重要的分子,参与角质形成层的形成,对小鼠及其他哺乳动物皮肤及内部器官起到保护作用。Gsdermin A3(Gsdma3)是GSDM家族成员之一,位于小鼠第11号染色体,该基因突变后小鼠表皮增厚,毛囊发育异常。成年鼠表皮发现颗粒状棘突,毛发脱落,皮色发灰白色。我们前期的研究发现Gsdma3基因突变鼠表皮细胞数量增多,表皮增厚,角质层增厚明显以及毛囊静止期延长等特点。这些都与角质形成细胞的增殖分化相关。提示Gsdma3基因可能与Krt6b有着相关关系。Wnt/β-catenin信号通路对皮肤上皮细胞的增殖分化起着至关重要的调节作用,我们之前的研究发现Gsdma3基因突变后,Wnt/β-catenin信号通路核心分子β-catenin表达量升高,提示Gsdma3基因与Wnt/β-catenin信号通路有着相关关系。Frizzled4是Wnt/β-catenin信号通路的受体之一,有报道指出,Frizzled4在毛囊周期进程中的表达具有时空异性,可能参与了毛囊周期的调节。除此之外,曾有报道指出,Krt6b受到Wnt/β-catenin信号通路Frizzled的调节,因此Gsdma3基因可能通过Frizzled4相关的Wnt/β-catenin信号通路来调节Krt6b的表达。研究目的:1.通过分析Gsdma3基因突变和过表达时,小鼠背部皮肤上皮细胞中Krt6b和Frizzled4表达的情况,探明Gsdma3基因对小鼠皮肤上皮细胞中Krt6b和Frizzled4表达的影响。2.通过抑制小鼠背皮皮肤中的Wnt/β-catenin信号通路观察Krt6b的表达情况,对Gsdma3基因调控Krt6b基因表达的机制加以初步探讨。研究方法:1、Gsdma3基因对Krt6b表达影响的研究通过利用野生型鼠(WT小鼠),Gsdma3基因突变鼠(AE鼠)及Gsdma3基因表达病毒等材料,应用病毒感染、免疫荧光、RT-PCR、Q-PCR、WB等实验技术方法,在野生型鼠(WT鼠)和Gsdma3基因突变鼠(AE鼠)对比实验、Gsdma3基因突变鼠(AE鼠)回补实验及野生型鼠(WT鼠)过表达实验,分析在体小鼠皮肤上皮细胞中,Gsdma3基因对Krt6b表达影响的情况,从而分析Gsdma3与Krt6b的相关关系。2、Gsdma3基因对Frizzled4表达影响的研究通过利用野生型鼠(WT小鼠),Gsdma3基因突变鼠(AE鼠),体外培养小鼠皮肤上皮细胞(JB6细胞)及Gsdma3基因表达病毒等材料,应用病毒感染、免疫荧光、RT-PCR、Q-PCR、WB等实验技术方法,从在体水和离体水平分别分析Gsdma3基因对Frizzled4表达情况的影响,同时得出Gsdma3基因与Frizzled4的相关关系。3、Gsdma3调节Krt6b机制的初步探明通过利用野生型鼠(WT小鼠),Gsdma3基因突变鼠(AE鼠)及Gsdma3基因表达病毒等材料,借助病毒感染、免疫荧光、Q-PCR、WB等实验技术方法,从在体水平上通过Gsdma3基因回补和过表达实验以及Gsdma3基因突变鼠(AE)Wnt/β-catenin信号通路抑制剂注射实验,分析Krt6b和Frizzled4表达的变化,从而初步探明Gsdma3调节Krt6b的机制。结果:1、从野生型鼠和Gsdma3基因突变鼠毛囊周期各个时相点出发,利用免疫荧光、RT-PCR、Q-PCR及WB的技术手段,其结果显示,Gsdma3基因突变鼠皮肤上皮细胞中Krt6b的表达上调;Gsdma3基因突变鼠回补实验,通过免疫荧光实验手段检测结果发现,Krt6b的表达下调;野生型鼠拔毛模型过表达Gsdma3基因,利用免疫荧光实验手段检测结果发现,Krt6b的表达也下调。2、从野生型鼠和Gsdma3基因突变鼠毛囊周期各个时相点出发,采用免疫荧光、RT-PCR、Q-PCR及WB的技术手段,检测结果表明,Gsdma3基因突变鼠皮肤上皮细胞中Frizzled4的表达上调;利用培养的小鼠皮肤上皮细胞过表达Gsdma3基因,通过免疫荧光、RT-PCR、Q-PCR及WB的技术手段,检测Frizzled4表达情况,其结果显示,Gsdma3基因过表达后,Frizzled4表达下调。3、在Gsdma3基因突变鼠回补实验及野生型鼠拔毛模型Gsdma3过表达实验中,利用RT-PCR、Q-PCR及WB的技术手段检测Krt6b和Frizzled4表达情况,其结果显示Frizzled4和Krt6b的表达量均发生下调。Gsdma3基因突变鼠背部皮肤注射Wnt/β-catenin信号通路抑制剂,利用免疫荧光手段检测,其结果显示Frizzled4和Krt6b的表达量均下调。结论:1、在小鼠皮肤上皮细胞中,Gsdma3基因可以抑制Krt6b基因的表达。2、在小鼠皮肤上皮细胞中,Gsdma3基因可以抑制Frizzled4基因的表达,Frizzled4是Wnt/β-catenin信号通路的受体之一。3、在小鼠皮肤上皮细胞中,Gsmda3基因可能通过抑制Frizzled4表达调控Krt6b的基因表达。4、
【关键词】：Gsdma3基因 Krt6b基因 Frizzled4基因 小鼠皮肤上皮细胞
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R751
【目录】：

• 英文缩写一览表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 Gasdermin A3基因在小鼠皮肤上皮中对Krt6b表达影响的实验研究13-31
• 2.1 实验材料13-16
• 2.2 实验方法16-23
• 2.3 实验结果23-29
• 2.4 讨论29-31
• 第三章 Gasdermin A3基因在小鼠皮肤上皮中对Frizzled4表达影响的实验研究31-53
• 3.1 实验材料31-34
• 3.2 实验方法34-44
• 3.3 实验结果44-51
• 3.4 讨论51-53
• 第四章 Gsdermin A3基因调控Krt6b基因表达的分子机制的初步探索53-70
• 4.1 实验材料53-56
• 4.2 实验方法56-63
• 4.3 实验结果63-68
• 4.4 讨论68-70
• 全文总结70-71
• 参考文献71-74
• 文献综述 皮肤干细胞的分化标记因子及其影响机制74-87
• 参考文献83-87
• 在读期间发表文章87-88
• 致谢88

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 邱静宜,童乐文;大庆原油及脱蜡油诱发小鼠皮肤癌的实验研究[J];中华劳动卫生职业病杂志;1991年03期

2 刘翠兰,陈禄;小鼠皮肤癌微血管分布的研究[J];中国放射肿瘤学;1990年03期

3 Bowden GT ,陈振军;小鼠皮肤辐射致癌的生物及分子研究概况[J];国外医学(放射医学核医学分册);1990年06期

4 苏波,唐洪泰,朱世辉,韦多,夏照凡,陈玉林,刘世康;烫伤小鼠供体皮肤特异性延长成活研究[J];第二军医大学学报;1999年03期

5 章金涛;方盛国;;豫医无毛小鼠皮肤形态及超微结构观察[J];浙江大学学报(理学版);2005年06期

6 ;用于小鼠皮肤损伤深入评价的非应激性保定装置[J];上海实验动物科学;1997年03期

7 陈l，

本文编号：808759