TRAIL在重症大疱型药疹角质形成细胞凋亡中作用的研究

发布时间：2017-09-21 18:10

  本文关键词：TRAIL在重症大疱型药疹角质形成细胞凋亡中作用的研究

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【摘要】：背景：角质形成细胞的凋亡是重症大疱型药疹(SBDE,包括SJS(史蒂文斯-约翰逊综合征)和TEN(中毒性表皮坏死松解症))早期关键事件。其免疫机制涉及CD8+T细胞、NK细胞、单核细胞等参与的细胞毒作用；而TNF-α、sFasL、granulysin(颗粒溶素)等细胞因子参与了凋亡作用的放大,现认为后者的作用可能更为重要。TRAIL(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)及其受体DR(死亡受体)4、DR5现认为是死亡受体相关凋亡中一条重要的通路,但在本病中研究较少,对其深入研究有助于阐明重症大疱型药疹发病的免疫机制。目的：从皮肤组织、疱液及外周血三个层面,研究角质形成细胞TRAIL及其受体的表达、疱液中细胞及外周血单个核细胞(PBMC) TRAIL的表达；分析sTRAIL(可溶性TRAIL)及本病中其他凋亡相关的细胞因子IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin在疱液及外周血中的浓度；并在HaCaT细胞中参照上述细胞因子浓度研究其对sTRAIL诱导角质形成细胞凋亡的影响,以期探索SBDE发病机制。方法：1.免疫组化检测SJS/TEN中的角质形成细胞TRAIL及DR4、DR5的表达。2.Western-Blot和RT-PCR检测SJS/TEN患者疱液中细胞TRAIL的表达(蛋白和mRNA);用流式细胞仪分析疱液中细胞表型,并与TRAIL的表达进行相关性分析。3. Western-Blot和RT-PCR检测SJS/TEN患者PBMC巾TRAIL的表达,并与疱液中细胞比较。4.ELISA检测疱液中的细胞因子sTRAIL、IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin浓度并与外周血比较。5.培养HaCaT细胞。流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI法检测sTRAIL单独及与IFN-γ、 TNF-α、sFasL、granulysin分别组合后的诱导HaCaT细胞凋亡作用,并进行比较。6.通过细胞爬片及免疫组化,分析上述细胞因子对HaCaT细胞TRAIL 及 RD4、DR5表达的影响。结果：1.在20例SJS/TEN皮肤组织中发现角质形成细胞高表达TRAIL及DR4、DR5,并且在浸润的炎症细胞中也有表达,较10例发疹型药疹对照有显著差异。2.在10例SJS/TEN疱液中细胞检测到TRAIL 的高表达(蛋白和 mRNA),较9例对照(白癜风表皮移植患者供皮区大疱)有显著差异,但表达有逐渐下降的趋势；同时疱液中CD8+T细胞、NK细胞比例下降而CD14+细胞增多,经多重回归分析发现TRAIL表达主要与CD8+T细胞有关。3.在15例SJS/TEN PBMC检测到TRAIL的表达低于疱液中细胞,但高于10例正常人及发疹型药疹PBMC对照,且表达相对疱液中细胞稳定。4. sTRAIL、IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin在SJS/TEN疱液中浓度高于外周血浓度,后者也高于10例正常人及发疹型药疹血清对照。但sTRAIL、IFN-γ、TNF-α浓度相对稳定而sFasL、granulysin浓度下降很快。5. HaCaT细胞实验发现sTRAIL单独对HaCaT细胞凋亡作用弱。仅TNF-α在疱液中浓度情况下表现出较强的诱导凋亡作用。但IFN-γ、TNF-α 与 sTRAIL存在协同作用而sFasL、granulysin无相关性,IFN-γ表现更为明显。6. IFN-γ、TNF-α可上调HaCaT细胞TRAIL及DR4、DR5的表达,IFN-γ上调DR5表达的作用更明显。结论：我们在SJS/TEN皮肤组织、疱液及外周血中均发现TRAIL的活化。PBMC中高表达TRAIL,血清sTRAIL的浓度也升高,意味着TRAIL也参与了本病的全身反应；而趋化至SJS/TEN皮肤组织的疱液细胞,尤其是早期的CD8+T细胞,TRAIL表达增强,可能通过直接结合或以高浓度的sTRAIL来诱导高表达DR4、DR5的角质形成细胞凋亡；角质形成细胞同时高表达TRAIL及DR4、DR5表明其在本病中不是单纯的“受害者”；通过HaCaT细胞实验发现,这种现象可能与IFN-γ、TNF-α的作用有关,且这两种细胞因子与sTRAIL协同可增强诱导凋亡的效果。因此,我们认为TRAIL与本病角质形成细胞凋亡有重要的联系,这也是发生在本病免疫紊乱的背景上的,是众多复杂的网络式的角质形成细胞凋亡机制之一。但在本病中药物如何引起包括TRAIL在内的免疫紊乱,以及TRAIL等死亡受体相关配体诱导角质形成细胞凋亡的确切机制还需要进一步研究。
【关键词】：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 重症大疱型药疹 角质形成细胞 凋亡
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R758.25
【目录】：

• 英文缩写介绍4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 引言11-17
• 参考文献14-17
• 第一部分 TRAIL在SJS/TEN患者皮肤组织、疱液中细胞、外周血单个核细胞的表达及sTRAIL和相关细胞因子在疱液和外周血中浓度的检测17-62
• 分题一 TRAIL在SJS/TEN患者皮肤组织中的表达17-26
• 参考文献25-26
• 分题二 不同时间段SJS/TEN疱液中细胞TRAIL的表达及细胞表型的分析26-48
• 参考文献46-48
• 分题三 SJS/TEN患者外周血单个核细胞TRAIL的表达及与疱液中细胞表达的比较48-54
• 参考文献53-54
• 分题四 SJS/TEN患者疱液及血清中细胞因子sTRAIL、TNF-α、sFasL、granulysin、IFN-γ的检测及比较54-62
• 参考文献61-62
• 第二部分 sTRAIL单独及与联合TNF-α、sFasL、granulysin、IFN-γ对HaCaT细胞凋亡的作用及上述四种细胞因子对HaCaT细胞TRAIL、DR4、DR5表达的作用62-81
• 分题一 sTRAIL单独对HaCaT细胞凋亡的作用62-68
• 参考文献66-68
• 分题二 TNF-α、sFasL、granulysin、IFN-γ诱导HaCaT细胞凋亡及与sTRAIL协同作用68-73
• 参考文献72-73
• 分题三 IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin对HaCaT细胞的TRAIL、DR4、DR5表达的作用73-81
• 参考文献80-81
• 全文小结81-82
• 本文局限性及不足82-83
• 致谢83-84
• 综述 SJS/TEN中角质形成细胞死亡机制的研究进展84-93
• 参考文献88-93
• 已发表论著93-112
• 重症大疱性药疹发病免疫机制及免疫治疗的研究进展93-99
• Combination therapy of intravenous immunoglobulin and corticosteroid in thetreatment of toxic epidermal necrolysis and Stevens-Johnson syndrome:aretrospective comparative study in China99-108
• SCORTEN评估华山医院重症大疱性药疹的可行性分析108-112

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 Chávez-Galán L;Arenas-Del Angel MC;Zenteno E;Chávez R;Lascurain R;;Cell Death Mechanisms Induced by Cytotoxic Lymphocytes[J];Cellular & Molecular Immunology;2009年01期

2 王贞丽;李金莲;王春波;;肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及扇贝多肽在UVA诱导HaCaT细胞凋亡中的作用[J];中国药理学通报;2007年10期

3 杨绍杰;孟金萍;屈yN;刘云波;;细胞凋亡信号传导通路的研究进展[J];中国比较医学杂志;2007年05期

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本文编号：896078