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熊果酸对干扰素γ刺激HaCaT细胞产生白细胞介素33的影响

发布时间:2017-09-22 21:29

  本文关键词:熊果酸对干扰素γ刺激HaCaT细胞产生白细胞介素33的影响


  更多相关文章: 熊果酸 IFN-γ 白细胞介素1 白细胞介素6 细胞外信号调节MAP激酶类 HaCaT细胞 白细胞介素33


【摘要】:背景银屑病是一个免疫细胞大量浸润的慢性炎症性皮肤疾病。免疫系统在其发病机制中起着重要作用。最近IL-23,TNF,IL-17等抗细胞因子治疗的成功,提示细胞因子作为细胞内的信号蛋白,在银屑病的发病机制中具有重要作用。IL-33,一个新发现的银屑病相关细胞因子,为探索银屑病的发病机制提供了新的前景。熊果酸作为一个具有抗炎作用的天然产物,其对IL-6、IFN-γ等炎性细胞因子的表达以及可能在炎症通路中的作用已经被报道。然而它在银屑病中对IL-33分泌的影响尚未报道。那么进一步探索熊果酸在银屑病中的抗炎效应及相关机制是非常必要的。目的探讨熊果酸对干扰素γ(IFN-γ)刺激HaCaT细胞产生白细胞介素33(IL-33)的影响及其机制。方法不同浓度熊果酸(0、0.1、1、5、10、20、40、80μmol/L)分别刺激HaCaT细胞24、48、72 h,MTT法检测其对细胞增殖的影响。将HaCaT细胞与IFN-γ共培养建成炎性细胞模型,再选取一定浓度熊果酸(10和15μmol/L)共培养,以IFN-γ诱导的HaCaT炎性细胞模型为对照,探讨熊果酸的抗炎作用,RT-PCR法检测IL-6和IL-33 m RNA的表达,Western印迹法检测IL-33、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白的表达。结果(1)MTT法检测显示,5~20μmol/L熊果酸作用24 h对细胞活力影响不大,而40~80μmol/L熊果酸在各个时间点均可明显抑制HaCaT细胞增殖(P0.05),为排除药物对细胞活力的影响,后续实验采用10和15μmol/L浓度。(2)HaCaT细胞经200μg/L IFN-γ刺激后,IL-33 m RNA(0.812±0.036)、IL-6m RNA(0.947±0.091)表达量和IL-33蛋白表达(1.317±0.119)均显著高于空白对照组(分别为0.412±0.021、0.595±0.030和0.147±0.036,均P0.05);而IFN-γ+10μmol/L熊果酸组(分别为0.447±0.042、0.437±0.099和0.923±0.058)和IFN-γ+15μmol/L熊果酸组(分别为0.438±0.028、0.350±0.075和0.564±0.113)又较IFN-γ组(分别为0.812±0.036、0.947±0.091和1.317±0.119)显著降低(均P0.05),且这两组IL-33 m RNA水平与空白对照组相比差异无统计学意义(P0.05),而IFN-γ+15μmol/L熊果酸组IL-33蛋白水平较IFN-γ+10μmol/L熊果酸组更低(P0.05)。(3)HaCaT细胞分别经IFN-γ刺激5、60 min后,p-ERK1/2蛋白表达均明显高于空白对照组。在此炎性细胞模型基础上加入15μmol/L熊果酸分别干预5 min、60min,IFN-γ+15μmol/L熊果酸5 min组和IFN-γ+15μmol/L熊果酸60 min组p-ERK1/2蛋白的相对表达量(0.458±0.053、0.302±0.054)分别低于IFN-γ5 min组(0.941±0.042)和60 min组(0.509±0.032),差异均有统计学意义(P0.05),而总ERK1/2蛋白表达量不变。结论(1)熊果酸对HaCaT细胞增殖的影响具有时间、浓度依赖性;(2)熊果酸能够降低IFN-γ刺激的HaCaT细胞IL-33的表达,具有抗炎活性;(3)熊果酸的抗炎作用可能与调节ERK信号通路相关蛋白的表达有关。
【关键词】:熊果酸 IFN-γ 白细胞介素1 白细胞介素6 细胞外信号调节MAP激酶类 HaCaT细胞 白细胞介素33
【学位授予单位】:新乡医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R758.63
【目录】:
  • 摘要5-7
  • Abstract7-10
  • 前言10-12
  • 1 实验材料12-16
  • 2 实验方法16-19
  • 3 结果19-22
  • 4 讨论22-26
  • 5 小结26-27
  • 附图27-30
  • 参考文献30-34
  • 综述:熊果酸在炎症性疾病中的作用以及银屑病的免疫学研究进展34-55
  • 参考文献46-55
  • 附录55-56
  • 攻读学位期间发表文章情况56-57
  • 致谢57-58
  • 个人简历58

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