Notch信号分子在血热型银屑病患者单个核细胞中的表达

发布时间：2017-09-29 01:33

  本文关键词：Notch信号分子在血热型银屑病患者单个核细胞中的表达

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【摘要】：银屑病俗称“牛皮癣”,中医称之为“白疙”,目前被认为是一种以红斑鳞屑为主要临床表现的慢性、炎症性皮肤病,通常侵犯皮肤和关节,且易复发。近年来发病率有逐渐增高的趋势,银屑病的确切病因仍有待研究,多数专家认为银屑病是由遗传因素和环境因素等多种因素相互交织作用所导致。其整个发病过程受到细胞因子网络与多种信号通路的调控。 Notch信号通路由Notch受体、Notch配体和CSL DNA结合蛋白三部分组成。广泛分布于造血干细胞,胚胎干细胞,淋巴细胞,血管内皮细胞等多种细胞表面。研究结果表明,Notch信号在银屑病的真皮处于活化状态,可通过影响T细胞的发育、活化及调节细胞因子的分泌参与银屑病的发生。有研究显示在包括角质形成细胞等多种表皮细胞的表面,Notch及其配体均有大量表达,且特异性的Notch信号活化在维持皮肤细胞自身更新及分化过程中起重要作用。异常的Notch信号可能有助于揭示银屑病等皮肤疾病的发病机制。 目前国内外药物干预Notch信号通路治疗银屑病的研究仍处于空白阶段,作用机理研究更为匮乏。因此,从免疫调节角度进行调控Notch信号通路治疗银屑病的药物研究十分必要,且具备广泛的探索空间。血热型银屑病相当于银屑病的初期(急性期)是临床表现最典型且多见的类型,祛银颗粒是导师白彦萍教授的自拟方药,以清热凉血解毒中药为主要成分,其良好的临床疗效已通过前期的临床及动物模型研究得到证实。但其具体作用机制和作用靶点尚不清楚。本研究旨在从分子生物学角度探讨Notch信号传导分子是否在血热型银屑病患者中发挥一定的作用。了解各传导分子的活跃情况将有助于支持后续清热凉血方药对Notch信号通路调控的相关研究。 目的：揭示血热型银屑病患者单个核细胞中Notch信号分子(Notch1-4、Delta1、 Delta3-4、Jaggedl-2)的表达情况,并对银屑病患者的病情严重程度与Notch信号分子的表达关系做出客观评价。 方法：收集纳入血热型银屑病患者,进行PAS I评分并采集患者外周血,提取出单个核细胞。以健康人为参照,分别采用实时荧光定量PCR法检测27例血热型患者和27例健康人的Notch信号分子mRNA表达水平；运用流式细胞术对6例血热型银屑病患者和5例健康人的Notch信号分子平均荧光强度的表达进行检测；采用蛋白免疫印记法(Western Blot)检测血热型银屑病30例和健康人30例的Notch信号通路的相关蛋白表达。 结果：(1)血热型银屑病患者单个核细胞中Notch2的mRNA水平较健康人显著升高,两者间差异有统计学意义,P=0.036(P0.05),其表达与PASI评分呈正相关趋势。 (2)血热型银屑病患者单个核细胞中Notch3的mRNA水平较健康人显著降低,两者间有显著性差异,P=0.008(P0.01),未发现其表达与PASI评分呈正相关趋势。 (3) Notch1、Notch4、Jagged1-2、Delta1、Delta3-4,在血热型银屑病患者单个核细胞中的mRNA水平较健康人无明显差异,两者间无统计学意义(P0.05)。 (4)血热型银屑病患者组的Notch2平均荧光强度(MFI)低于健康人对照组的Notch2MFI表达水平,两者比较有显著差异(P0.01),其与PASI评分无明显相关性。 (5)血热型银屑病患者组的Notch1、Noth3平均荧光强度(MFI)与健康人对照组的Notch1、Noth3MFI两者比较无统计学意义(P0.05)。 (6) Western Blot显示健康人组与血热型患者组比较,血热型患者组Delta4蛋白表达明显上调,有显著统计学差异(P0.01)。其与PASI评分无明显相关性。 (7) Western Blot显示健康人组与血热型患者组比较,Notch1、Deltal蛋白表达无明显差异,两者间无统计学意义(P0.05)。 结论：Notch2在mRNA和蛋白表达方面较健康人均有所升高,Delta4的蛋白表达较健康人升高。其中Notch2mRNA与表达与银屑病的严重程度呈正相关；Notch3mRNA表达较健康人有所下降,但其与银屑病的严重程度无明显相关性。Notch信号通路参与了血热型银屑病的发生、发展等调节过程。
【关键词】：Notch 信号通路 血热型 银屑病 单个核细胞
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文缩略语9-10
• 第一部分 文献综述10-35
• 综述一：中医“血分论治”银屑病内服用药规律探讨及研究进展10-22
• 参考文献19-22
• 综述二：Notch信号通路与银屑病的相关性研究概况22-35
• 参考文献31-35
• 第二部分 实验研究35-125
• 前言35-37
• 实验一：实时荧光定量PCR检测血热型银屑病人单个核细胞中Notch信号分子microRNA的表达研究37-96
• 材料和方法37-44
• 结果44-93
• 讨论93-96
• 实验二：流式细胞术检测血热型银屑病人单个核细胞中Notch受体的表达96-107
• 材料和方法96-99
• 结果99-106
• 讨论106-107
• 实验三：蛋白质印迹法检测血热型银屑病人单个核细胞中Notch信号分子的表达107-122
• 材料和方法107-112
• 结果112-120
• 讨论120-122
• 参考文献122-125
• 全文小结125-126
• 不足与展望126-127
• 致谢127-128
• 个人简历128

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：939260