MicroRNA-152对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

发布时间：2017-10-03 22:31

  本文关键词：MicroRNA-152对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

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【摘要】：研究背景及目的：瘢痕疙瘩是皮肤创伤愈合的过程中,成纤维细胞异常增殖、胶原过量沉积导致的纤维过度增生性疾病,临床表现为超过原始皮损边界、隆起于正常皮肤、常以蝶形或哑铃形生长的良性肿块。瘢痕疙瘩患者可有局部瘙痒、疼痛等症状,并可因搔抓、物理摩擦等因素导致感染,严重者可继发溃疡甚至发生瘢痕癌；若发生瘢痕挛缩则可能导致功能障碍。尽管瘢痕疙瘩为一种良性疾病,不发生远处转移,但因其严重影响美观,且尚无单一有效的治疗办法能显著改善其预后并减少复发,对患者的生活质量和身心健康造成巨大损害。目前对瘢痕疙瘩的发病原因存在多种解释,已知遗传、基因调控、细胞因子、免疫等多种因素均与瘢痕疙瘩的发病过程密切相关,但具体的发病原因尚不清楚。因此,进一步探索瘢痕疙瘩的发病机制及寻找有效的治疗办法成为整形外科临床医生及科研工作者们亟待解决的问题。MicroRNA是一类非编码小分子RNA,长度为22-25nt,在真核生物基因转录和／或翻译水平具有广泛的调控作用。现已发现microRNA参与了肿瘤、心血管疾病、皮肤纤维化及某些代谢病的发生发展,近年来研究发现microRNA还可以作为生物标记物及治疗靶点而应用于临床。目前,国内外关于microRNA在瘢痕疙瘩发生、发展中的作用及机制研究尚处于起步阶段,相关研究主要集中于对瘢痕疙瘩组织或成纤维细胞中差异表达的microRNA的筛选。以往的研究发现microRNA-152在瘢痕疙瘩成纤维细胞中存在异常表达,但其在瘢痕疙瘩发生、发展中的具体作用尚不清楚。本研究拟通过在体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞中转染microRNA-152拟似物实现microRNA-152的过表达,进一步研究microRNA-152对于瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成方面的作用,并探讨可能的作用机制,以期从一定程度上解释瘢痕疙瘩的发病机制,并为瘢痕疙瘩的治疗提供理论依据。研究方法：收集手术切除的新鲜瘢痕疙瘩标本,体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,以脂质体2000转染microRNA-152 mimics(拟似物),从而实现microRNA-152的过表达,应用实时荧光定量PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中microRNA-152的表达情况；利用CCK法检测转染后不同时期瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡情况；利用羟脯氨酸比色法分析microRNA-152转染对于瘢痕疙瘩成纤维细胞上清液中总胶原合成的影响；利用western blot分析瘢痕疙瘩成纤维细胞内Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达情况；并利用实时荧光定量PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原及TGF-β1 mRNA的水平。结果：在本研究中实验组细胞成功转染microRNA-152,与对照组相比实现了microRNA-152的过表达,实时荧光定量PCR法RQ值(3.658±0.026)vs.(1.016±0.031),p0.05；CCK法检测发现与对照组相比,microRNA-152过表达组细胞增殖率升高,48h吸光值(0.699±0.031)vs.(0.588±0.0071),p0.05；72h吸光值(0.726±0.0095)vs.(0.633±0.011),p0.05；microRNA152过表达组上清液中胶原蛋白含量增加,与对照组相比羟脯氨酸含量(μg/ml)为(3.909±0.015) vs. (2.311±0.075), p0.05; Western blot检测到microRNA-152过表达组瘢痕疙瘩成纤维细胞内Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的含量增加；RealTime PCR检测到瘢痕疙瘩成纤维细胞中Ⅰ型、Ⅲ型前胶原基因(COL1A、COL3A1)及TGF β-1基因mRNA水平增加,RQ值分别为(1.75±0.019)vs.(1.063±0.017),p0.05；(1.356±0.074)vs.(1.045±0.061),p0.05；(2.12±0.03)vs.(1.08±0.033),p0.05。结论：研究首次证实了microRNA-152可以促进瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原蛋白合成。因此microRNA-152可能是瘢痕疙瘩发病中的重要分子之一,有望成为新的生物标记物及瘢痕疙瘩治疗的潜在靶点。
【关键词】：瘢痕疙瘩 成纤维细胞 microRNA-152 细胞增殖 胶原蛋白
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R751
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本文编号：967127