过表达EGFR在人类黑色素瘤脑转移瘤细胞系H1中的影响

发布时间：2017-10-09 02:29

  本文关键词：过表达EGFR在人类黑色素瘤脑转移瘤细胞系H1中的影响

  更多相关文章： 表皮生长因子受体 表皮生长因子 转化生长因子α 黑色素瘤

【摘要】：背景与目的黑色素瘤是一种具有高度侵袭及转移性的恶性肿瘤,它尽管只占据了皮肤肿瘤中的4%,却导致了皮肤肿瘤相关疾病死亡率中的80%。在过去的60年中,黑色素瘤的发生率提高了近700%,而死亡率也提高了165%。现在,黑色素瘤的首选治疗方案仍然是手术切除,但是治愈率却很大程度上取决于其是否能早期诊断。黑色素瘤转移迅速,由于预后因素复杂且对标准化疗的反应率较低,转移性黑色素瘤的存活时间中位数低于一年。虽然全世界不少学者致力于黑素瘤的研究,但是至今为止黑色素瘤发展及转移的机制仍未阐述清楚。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)是170KD大小具有酪氨酸激酶活性的膜受体,可被表皮样生长因子如表皮生长因子(EGF)和转化生长因子α (TGF-α)等激活,同ErbB2 (HER2 or Neu), ErbB3 (HER3)和ErbB4 (HER4)一样隶属于ErbB受体家族。EGFR被证实与很多人类肿瘤的发生发展及不良预后有关,同样其也参与了黑色素瘤的发展与转移。我们的研究目的是探索EGFR在黑色素瘤转移过程中的作用,从而为黑色素瘤的靶向治疗提供可能的理论依据。材料与方法选用本实验室已经建立的人黑色素瘤脑转移瘤的细胞系(H1),病毒质粒转染野生型EGFR使其呈EGFR过表达状态细胞(HIEGFRwt),同时对照组转染绿色荧光蛋白GFP (H1GFP)。观察不同浓度的表皮生长因子(EGF)以及转化生长因子a(TGF-α)刺激下的创伤愈合实验结果,集落形成实验来观察EGFR对细胞独立生存能力和集落形成能力的影响,免疫印迹实验(western blot)探索不同浓度的EGF以及TGF-a刺激下EGFR激活的信号通路。将H1EGFRwt细胞和H1GFP细胞注入免疫缺陷小鼠心脏,采用磁共振成像(MRI)方法观察肿瘤形成和转移情况。结果创伤愈合实验中过表达的EGFR在EGF和TGF-a的刺激下均提高了H1细胞的迁移能力,与对照组相比愈合速度明显增快(P0.05)。集落形成实验证实EGFR过表达H1细胞的独立生存以及集落形成能力与对照组相比明显提高。Western blot结果显示EGFR可在EGF的刺激下激活下游信号磷酸化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(pPLCg)、磷酸化信号转导和转录活化因子5 (pSTAT5)、磷酸化信号转导和转录活化因子3 (pSTAT3)、磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT) (Ser473)和磷酸化有丝裂原活化蛋白激酶(pMAPK),然而当予以相同浓度TGF-a刺激时,以上信号通路均不能激活。MRI结果显示,H1EGFRwt细胞植入后,只可以在小鼠脑部检测到肿瘤信号,其他器官均为发现,且与对照组相比无明显差异。结论过表达的EGFR在人黑色素瘤转移瘤细胞系H1细胞的转移机制中提高了细胞的独立生存和集落形成能力,在EGF和TGF-a的刺激下可明显提高H1EGFRwt的迁移能力。此外,在EGF的刺激下可激活pPLC γ、pSTAT 5、pSTAT 3、pAKT和pMAPK等下游信号,但我们无法解释TGF-a的刺激下所测信号均不能激活的原因。同样,对于实验性动物实验所得数据,我们认为仍需更多的体内实验以及可动态监测肿瘤生长转移情况的PET-CT检测结果才可进一步得出结论。综上所述,EGFR对黑色素瘤的转移机制有一定的促进意义,但仍需要更多的体内体外实验研究,EGFR有可能成为黑色素瘤转移治疗中的靶向目标,我们的研究可能为此也提供了一定的理论依据。
【关键词】：表皮生长因子受体 表皮生长因子 转化生长因子α 黑色素瘤
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 符号说明13-14
• 前言14-17
• 材料和方法17-24
• 1.1 材料17
• 1.1.1 细胞17
• 1.1.2 试剂17
• 1.1.3 抗体17
• 1.2 实验方法17-24
• 1.2.1 细胞培养17-18
• 1.2.2 流式细胞术分析H1细胞系中EGFR的表达18
• 1.2.3 EGFR的过表达与分选18-19
• 1.2.4 创伤愈合实验19-20
• 1.2.5 集落形成实验20-21
• 1.2.6 免疫印迹实验(Western blot)21-23
• 1.2.7 磁共振检测23-24
• 结果24-33
• 1.1 H1细胞系的EGFR表达24-25
• 1.2 创伤愈合实验结果25-30
• 1.3 集落形成实验结果30
• 1.4 Western blot结果30-31
• 1.5 MRI检测结果31-33
• 讨论33-43
• 1.1 EGFR在黑色素瘤中的表达与意义33-34
• 1.2 EGFR与黑色素瘤转移间的关系34-36
• 1.3 EGFR激活的信号通路36-37
• 1.4 EGF和TGF-α37-40
• 1.4.1 TGF-α及其功能37-39
• 1.4.2 EGF及其功能39-40
• 1.4.3 TGF-α与EGF40
• 1.5 动物实验40-41
• 1.6 EGFR相关的靶向治疗41-43
• 结论43-44
• 参考文献44-57
• 致谢57-58
• 攻读学位期间发表的学术论文目录58-59
• 附件59

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本文编号：997678