α-硫辛酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的治疗作用及Nrf2表达的影响

发布时间：2017-10-10 20:38

  本文关键词：α-硫辛酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的治疗作用及Nrf2表达的影响

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【摘要】：目的:多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种导致青年人残疾的常见的自身免疫性脱髓鞘疾病,具体的发病机制不清,遗传和环境等多种因素的共同作用参与并诱导了MS的发病,近年来,氧化应激(oxidative stress,OS)作为MS的发病机制之一日益引起人们的关注。核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2 related factor 2,Nrf2)属于cap‘n’collar(CNC)家族中的一种核转录因子。在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)、帕金森病(Parkinson’s disease,PD)、肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)及多发性硬化(MS)等疾病中,Nrf2能够与抗氧化反应原件(antioxidant response element,ARE)结合,提高机体的抗氧化应激能力,从而增强细胞保护、减轻神经损伤、延缓病情进程。Nrf2作为调节内源性抗氧化应激系统的关键调节因子正逐渐成为人们研究的焦点,为治疗提供了新的方向。α-硫辛酸(alpha lipoic acid,α-LA)是一种天然抗氧化剂,本实验使用α-LA对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠进行干预,通过观察EAE小鼠的神经功能缺损评分、体重及精神状态、活动度等临床表现的改变和小鼠脊髓腰膨大组织Nrf2的表达情况,进一步探讨α-LA对EAE小鼠的治疗和保护作用、对Nrf2表达的影响及其在EAE小鼠中发挥抗氧化应激的相关机制,为临床治疗MS提供新的理论和实验依据。方法:1建立EAE模型使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)多肽片段作为抗原免疫,神经功能缺损评分大于或等于0.5分为模型成功。2实验动物及分组将发病后的C57BL/6小鼠36只随机分为EAE组、α-硫辛酸组,每组各18只;另随机选取18只正常小鼠为正常对照组(normal control group,NC group)。3干预方法NC组、EAE组:每日腹腔注射等体积的二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide,DMSO),共注射14天;α-LA组:每日腹腔注射α-硫辛酸15mg/kg/d。4观察指标分别于发病后第0天、第7天及第14天观察C57BL/6小鼠自免疫后的神经功能缺损评分、体重、精神状态、活动情况等临床表现;随后处死小鼠取脊髓腰膨大组织,使用HE染色和免疫组织化学染色的方法观察小鼠脊髓腰膨大的组织病理学结果,即炎性细胞浸润程度及Nrf2的表达情况,用实时荧光定量PCR法测定小鼠脊髓腰膨大组织Nrf2m RNA的表达水平。结果:1各组小鼠发病的一般情况和临床表现:NC组小鼠精神正常、食欲正常、毛色光泽、活动灵活自如、体重逐渐增加;α-LA组、EAE组小鼠自免疫后第10天左右均开始发病,出现体重下降、尾部及肢体瘫痪、精神差、食欲差、毛色黯淡、活动减少等症状,α-LA组小鼠上述症状较EAE组小鼠减轻。2各组小鼠发病第7天体重:EAE组和α-LA组小鼠体重较NC组均有所下降(P0.05),但EAE组小鼠体重减轻程度较α-LA组更为明显(P0.05)。3各组小鼠发病第7天神经功能缺损评分:EAE组及α-LA组小鼠神经功能缺损评分明显高于NC组(P0.05),且EAE组小鼠神经功能缺损程度最重(P0.05)。4 HE染色:EAE0天组(EAE0)、EAE7天组(EAE7)以及EAE14天组(EAE14)小鼠脊髓腰膨大组织均存在炎性细胞浸润;其中,以EAE7天组炎性细胞浸润程度最为显著。α-LA0天组(α-LA0)、α-LA7天组(α-LA7)和α-LA14天组(α-LA14)小鼠炎性细胞浸润程度较轻,炎性病灶数明显减少。5免疫组织化学染色:EAE0、EAE7、EAE14小鼠脊髓腰膨大组织Nrf2阳性细胞数低于NC组(P0.05);α-LA7、α-LA14 Nrf2阳性细胞数较正常对照组增多(P0.05);α-LA7 Nrf2阳性细胞数高于EAE7天组(P0.05);α-LA14 Nrf2阳性细胞数高于EAE14天组(P0.05)。6实时荧光定量PCR:EAE14小鼠脊髓腰膨大组织Nrf2m RNA的表达量低于NC组(P0.05);α-LA7小鼠脊髓腰膨大组织Nrf2m RNA的表达较EAE7明显升高(P0.05);而α-LA14与EAE14的Nrf2m RNA的表达量无明显差异(P0.05)。结论:1体重下降对EAE小鼠发病具有提示作用;神经功能缺损评分对病情严重程度具有评价作用;α-硫辛酸能够改善EAE小鼠的精神状态、食欲、活动度等临床表现,减轻EAE小鼠体重下降程度,并降低其神经功能缺损评分,对EAE小鼠具有治疗和保护作用。2 Nrf2是机体内重要的抗氧化应激因子,α-硫辛酸有可能就是通过提高Nrf2的表达增强了EAE小鼠的抗氧化应激作用。
【关键词】：多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 α-硫辛酸 抗氧化应激 Nrf2
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R744.51
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-21
• 结果21-23
• 附图23-28
• 附表28-30
• 讨论30-34
• 结论34-35
• 参考文献35-39
• 综述 氧化应激与多发性硬化39-48
• 参考文献45-48
• 致谢48-49
• 个人简历49-50

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本文编号：1008527