PI3K-AKT通路对脑缺血损伤神经干细胞的增殖作用

发布时间：2017-10-14 16:17

  本文关键词：PI3K-AKT通路对脑缺血损伤神经干细胞的增殖作用

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【摘要】：目的:利用低氧干预分离的小鼠神经干细胞,通过构建腺病毒载体将腺病毒5-丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶3(Ad5-AKT3)基因和丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶3小干扰RNA(AKT3 si RNA)干扰转染至缺血神经干细胞,探索磷酸肌醇三磷酸激酶-丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K-AKT)通路对缺血性神经干细胞的增殖作用。方法:取新生24h昆明小鼠海马,分离培养原代神经干细胞,并采用巢蛋白(Nestin)免疫荧光检测和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)渗入实验对其进行鉴定;将所培养的传代神经干细胞随机分组:正常组、缺血模型组、低氧组(低氧+缺血模型组)、Lip2000组(低氧+缺血模型组+Lip2000空转染组)、AKT转染组(低氧+缺血模型组+Ad5-AKT3转染组)、AKT干扰组(低氧+缺血模型组+Lip2000+AKT3 si RNA干扰组)。建立脑缺血损伤的体外模型,低氧干预,构建腺病毒Ad5-AKT3载体和AKT3 si RNA后,各组行MTT检测;RT-q PCR检测AKT3 m RNA表达情况;Werstern Blot检测PI3K、AKT3、PCNA。结果:通过免疫荧光检测Nestin鉴定神经干细胞球,在荧光显微镜下观察到绿色明亮且典型的细胞球,球内可见清晰结构;渗入Brdu免疫荧光检测可见整个着色细胞球。MTT OD值和RT-q PCR检测AKT3 m RNA均显示,与正常组相比,模型组和AKT干扰组下降(P0.05),其余各组均升高(P0.05),其中低氧组和Lip2000组之间无明显差异(P0.05)。与模型组相比,除AKT干扰组下降外(P0.05),其余各组均升高(P0.05)。Western Blot检测PI3K、AKT3、PCNA蛋白表达与正常组相比,模型组和AKT干扰组表达量减少(P0.05),低氧组、Lip2000组和AKT转染组均增加(P0.05),其中AKT转染组差异最明显(P0.01)。结论:PI3K-AKT信号通路在低氧干预下有效促进神经干细胞的增殖过程。
【作者单位】： 福建医科大学附属教学医院南京军区福州总医院神经内科;南京军区福州总医院骨科;
【关键词】： PIK-AKT信号通路 神经干细胞 腺病毒AKT载体 AKT干扰
【基金】：南京军区医药卫生科研基金(12MA100)
【分类号】：R743
【正文快照】： 神经干细胞是一类存在于中枢神经系统内具有高度增殖、自我更新及分化能力,在一定条件下能不断进行有丝分裂并分化成神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的原始母细胞。基于神经干细胞上述良好特性,神经干细胞移植研究取得了重要进展,在缺血缺氧性脑病[1—2]、阿尔茨海默病[3]

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本文编号：1032011