肿瘤微环境中MFG-E8对神经胶质瘤的作用及其机制研究

发布时间：2017-10-14 17:36

  本文关键词：肿瘤微环境中MFG-E8对神经胶质瘤的作用及其机制研究

  更多相关文章： MFG-E8 神经胶质瘤细胞 肿瘤相关小胶质细胞 肿瘤微环境

【摘要】：目的:研究乳脂肪球表皮生长因子8蛋白(MFG-E8)对神经胶质瘤的作用及其作用机制,探讨肿瘤微环境中MFG-E8对肿瘤相关小胶质细胞M2型活化的影响。方法:建立稳定表达GFP/MFG-E8 sh RNA的GL261神经胶质瘤细胞系并且用RT-PCR和ELISA方法鉴定干扰效率;MTT法、细胞计数法和集落形成实验检测细胞增殖;细胞实时检测系统和划痕实验检测细胞迁移;MTT法检测神经胶质瘤对抗肿瘤药物BCNU的药物敏感性;Western blot检测神经胶质瘤细胞生存相关蛋白表达;原位种瘤实验检测神经胶质瘤细胞接种于C57 BL/6小鼠脑内肿瘤发生、发展进程以及通过免疫荧光组织化学法和细胞流式技术检测肿瘤微环境中CD11b+小胶质细胞浸润和M2型标记物CD206表达。结果:沉默MFG-E8能够减慢神经胶质瘤的增殖、迁移,并且能够增强神经胶质瘤细胞对抗肿瘤药物BCNU的药物敏感性;沉默MFG-E8可以降低FAK的磷酸化、AKT的磷酸化以及ERK的磷酸化;沉默MFG-E8能明显减少STAT3的磷酸化和Cyclin D1的表达;小鼠胶质瘤模型表明沉默MFG-E8能抑制脑内肿瘤的发生和发展进程,改善个体生存时间;沉默MFG-E8可以显著减少肿瘤组织中CD11b+小胶质细胞的浸润,并且能减少肿瘤组织中浸润的小胶质细胞M2型标记物CD206的表达。结论:GL261神经胶质瘤细胞沉默MFG-E8减慢神经胶质瘤的增殖、迁移并增强其药物敏感性,可能通过下调信号转导及转录活化因子3(STAT3)信号通路。在小鼠胶质瘤模型中,沉默MFG-E8可显著减小肿瘤大小,并且伴随着CD11b阳性细胞浸润的减少和M2型CD206表达的降低。
【关键词】：MFG-E8 神经胶质瘤细胞 肿瘤相关小胶质细胞 肿瘤微环境
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-12
• 实验材料和方法12-22
• 1 实验动物和细胞12
• 2 实验仪器12
• 3 实验试剂12-13
• 4 实验方法13-21
• 4.1 溶液配制13-14
• 4.2 细胞培养14-15
• 4.3 Western Blot免疫印迹15-16
• 4.4 总RNA提取和RT-PCR16-18
• 4.5 MTT检测18
• 4.6 ELISA18-19
• 4.7 增殖实验19
• 4.8 迁移实验19-20
• 4.9 体内肿瘤模型建立20
• 4.10 流式细胞技术20
• 4.11 免疫细胞组织化学20-21
• 4.12 小鼠活体成像21
• 5 数据处理和统计学方法21-22
• 实验结果22-31
• 1 GL261-GFP-SHMFG-E8 细胞系建立和鉴定22-24
• 2 沉默MFG-E8 能够减慢神经胶质瘤增殖、迁移和增强GL261 对抗肿瘤药物BCNU 的敏感性24-26
• 3 沉默MFG-E8 能够下调细胞生存信号蛋白26-27
• 4 GL261 神经胶质瘤细胞沉默MFG-E8 能够削减体内肿瘤进程27-28
• 5 沉默MFG-E8 能够降低肿瘤组织内CD11B和CD206 的表达28-30
• 6 重组蛋白MFG-E8 (RMMFG-E8) 能够增加小胶质细胞M2 型标记物的表达30-31
• 讨论31-33
• 小结33-34
• 参考文献34-38
• 综述 神经胶质瘤与神经胶质瘤相关巨噬细胞/小胶质细胞的关系研究38-49
• 参考文献44-49
• 攻读学位期间发表的论文49-50
• 附录：缩略词表50-51
• 致谢51-52

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本文编号：1032305