EAE小鼠脑及脊髓组织中IL-17及c-Maf表达与病程关系的研究

发布时间：2017-10-23 17:28

  本文关键词：EAE小鼠脑及脊髓组织中IL-17及c-Maf表达与病程关系的研究

  更多相关文章： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 IL-17 c-Maf 多发性硬化

【摘要】：目的:探讨IL-17及c-Maf在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠不同发病时期脑及脊髓组织中的动态变化,进一步探讨IL-17及c-Maf在EAE的发病机制中的作用。方法:按照随机数字法将36只10-12周龄,体重在18-22g之间的雌性C57BL/6小鼠,分为EAE组18只和对照组18只。本研究采用髓鞘少突细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)35-55多肽/完全弗氏佐剂(CFA)的方法免疫C57BL/6小鼠制备EAE模型。对照组小鼠仅给予生理盐水注射。每天观察每只小鼠的临床表现,称重并参照评分标准进行神经功能评分。将免疫后第10天记为发病前期,第18天记为发病高峰期,第30天记为缓解期,并在两组中分别取材,记为发病高峰期组和缓解期组。将两组小鼠按不同时期处死后取脑组织做石蜡切片,观察炎症细胞浸润的情况,取脊髓组织做LFB染色,观察脱髓鞘情况。采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测各时期两组小鼠脑及脊髓组织中IL-17m RNA及c-Maf m RNA含量并进行比较,观察各个时期的动态表达情况。采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析,计量资料以x±SD表示,所有数据进行方差齐性检验和正态性检验,比较采用t检验,多组间参数比较采用单因素方差分析,计量资料组间比较进行方差分析和q检验。检验水准α=0.05,以P0.05作为差异显著性指标。结果:1、动物发病情况:EAE组的小鼠均出现临床症状,体重明显下降,平均体重均低于对照组,具有统计学差异(P0.05);且EAE组神经功能评分均高于对照组,具有统计学差异(P0.05)。2、组织病理学观察:2.1 HE染色2.1.1发病前期:EAE组中小鼠的脑组织中发现少数单核细胞和淋巴样细胞浸润,未见血管袖套样改变。对照组小鼠的脑组织中无明显上述表现。2.1.2发病高峰期:EAE小鼠的脑组织中出现大量单核细胞和淋巴样细胞浸润和血管袖套样改变。对照组小鼠的脑组织中无明显上述表现。2.1.3缓解期:EAE小鼠的脑组织中单核样细胞和淋巴样细胞减少,血管袖套样改变消失。对照组小鼠的脑组织中无明显上述表现。2.2 LFB染色2.2.1发病前期:EAE小鼠的脊髓组织中出现白质疏松。对照组小鼠的脊髓组织中无明显上述表现。2.2.2发病高峰期:EAE小鼠的脊髓组织中可见明显脱髓鞘改变。对照组小鼠的脊髓组织中无明显上述表现。2.2.3缓解期:EAE小鼠的脊髓组织中可见脱髓鞘改变。对照组小鼠的脊髓组织中无明显上述表现。3、脑组织中IL-17 m RNA及c-Maf m RNA的含量及动态变化3.1脑组织中IL-17 m RNA的含量:3.1.1发病前期:EAE组小鼠的脑组织中IL-17m RNA表达比对照组高,具有统计学差异(P0.05)。3.1.2发病高峰期:EAE组小鼠的脑组织中IL-17m RNA表达明显高于对照组,具有统计学差异(P0.05)。3.1.3缓解期:EAE组小鼠的脑组织的IL-17m RNA表达高于对照组,具有统计学差异(P0.05)。3.1.4动态变化:对照组中,IL-17m RNA在各时间点的表达差距不大,没有统计学意义(P0.05)。EAE组中,IL-17m RNA各时间点表达显示,发病高峰期高于发病前期和缓解期,具有统计学差异(P0.05)。3.2脑组织中c-Maf m RNA的含量:3.2.1发病前期:EAE组的c-Maf m RNA表达较对照组高,有统计学差异(P0.05)。3.2.2发病高峰期:EAE组的c-Maf m RNA表达明显高于对照组,具有统计学差异(P0.05)。3.2.3缓解期:EAE组的c-Maf m RNA表达高于对照组,具有统计学差异(P0.05)。3.2.4动态变化:空白对照组各时间点c-Maf m RNA表达差距不大,没有统计学差异(P0.05)。EAE组各时间点c-Maf m RNA表达发病高峰期高于发病前期和缓解期,具有统计学差异(P0.05)。4、脊髓组织中IL-17 m RNA及c-Maf m RNA的含量及动态变化4.1脊髓组织中IL-17m RNA的含量:4.1.1发病前期:EAE组的IL-17m RNA表达较对照组高,有统计学差异(P0.05)。4.1.2发病高峰期:EAE组的IL-17m RNA表达明显高于对照组,具有统计学差异(P0.05)。4.1.3缓解期:EAE组的IL-17m RNA表达高于对照组,具有统计学差异(P0.05)。4.1.4动态变化:对照组各时间点IL-17m RNA表达差距不大,没有统计学意差异(P0.05)。EAE组各时间点IL-17m RNA表达发病高峰期高于发病前期和缓解期,具有统计学差异(P0.05)。4.2脊髓组织中c-Maf m RNA的含量:4.2.1发病前期:EAE组的c-Maf m RNA表达较对照组高,有统计学差异(P0.05)。4.2.2发病高峰期:EAE组的c-Maf m RNA表达明显高于对照组,具有统计学差异(P0.05)。4.2.3缓解期:EAE组的c-Maf m RNA表达高于对照组,具有统计学差异(P0.05)。4.2.4动态变化:空白对照组各时间点c-Maf m RNA表达差距不大,没有统计学差异(P0.05)。EAE组各时间点c-Maf m RNA表达发病高峰期高于发病前期和缓解期,具有统计学差异(P0.05)。结论:随着免疫时间的延长及EAE小鼠的病程进展,IL-17及其重要的调控因子c-Maf的表达水平呈先增高后下降的趋势。IL-17及c-Maf与EAE的发生、发展和缓解存在重要联系。
【关键词】：实验性自身免疫性脑脊髓炎 IL-17 c-Maf 多发性硬化
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R744.5
【目录】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 缩略语12-13
• 第1章 引言13-15
• 第2章 材料与方法15-21
• 2.1 实验动物及分组15
• 2.2 试剂15-16
• 2.3 主要仪器16
• 2.4 手术材料和器械16
• 2.5 动物模型的建立16-17
• 2.6 动物发病的观察17
• 2.7 取材17
• 2.8 HE染色17-18
• 2.9 LFB染色18-19
• 2.10 RT-PCR检测脑组织和脊髓组织中的IL-17和c-Maf的mRNA水平19-21
• 2.10.1 提取RNA19
• 2.10.2 cDNA第一链的合成19
• 2.10.3 聚合酶链式反应19-20
• 2.10.4 电泳鉴定20-21
• 第3章 结果21-25
• 3.1 发病总体情况21-22
• 3.1.1 体重变化比较21
• 3.1.2 神经功能缺损评分比较21-22
• 3.2 病理结果观察22
• 3.2.1 两组小鼠的HE染色22
• 3.2.2 两组小鼠的LFB染色22
• 3.3 两组小鼠RT-PCT方法检测IL-17mRNA和c-MafmRNA的表达结果22-25
• 3.3.1 EAE组和对照组脑组织中IL-17mRNA和c-MafmRNA的表达情况22-23
• 3.3.2 EAE组和对照组脊髓组织中IL-17mRNA和c-MafmRNA的表达情况23-25
• 第4章 讨论25-28
• 第5章 结论与展望28-29
• 5.1 结论28
• 5.2 展望28-29
• 致谢29-30
• 参考文献30-33
• 附图33-36
• 攻读学位期间的研究成果36-37
• 综述 EAE模型的研究进展37-43
• 参考文献42-43

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 赵子牛,付海霞,林道明;缺血预处理对兔缺血损伤脊髓组织中自由基变化的影响[J];温州医学院学报;2002年05期

2 赵敏;刘玲;张世强;杨天祝;张英泽;潘进社;;脊髓组织蛋白质组分析中双向电泳技术应用效果观察[J];山东医药;2010年22期

3 张衡,高建新,徐桂艳,刘沂训;胚胎脊髓组织植入成年鼠损伤脊髓的形态学研究[J];山东医科大学学报;1999年03期

4 梁朝革;贾连顺;陈长青;陈梓峰;;椎体火器伤对挫伤脊髓组织铁蛋白表达的影响[J];创伤外科杂志;2006年06期

5 张屹;赵敏;;微波幅射固定脊髓组织及保存其超微结构[J];广东解剖学通报;1991年01期

6 周初松,靳安民,马大烈;大鼠脊髓组织一氧化氮合酶显微及超微结构特征[J];第一军医大学学报;2000年06期

7 赵刚,廖维宏,蔡锦方,张亚彬;同种胚胎脊髓移植物对成年大鼠损伤脊髓组织形态与功能的修复作用[J];中华器官移植杂志;1997年02期

8 李琦;曾炳芳;徐建广;孔维清;;人胶质源性神经生长因子真核表达载体构建及在大鼠脊髓组织中的表达[J];中国修复重建外科杂志;2007年05期

9 ;大鼠脊髓创伤后脊髓组织中3种内源性阿片肽含量的动态变化及意义[J];第二军医大学学报;1995年05期

10 张秋林,李明,赵杰,王秋根,侯铁胜,李珍,张玲妹;强啡肽A致截瘫大鼠脊髓组织细胞外腺苷浓度的变化[J];第二军医大学学报;2001年10期

中国重要会议论文全文数据库 前4条

1 王一健;石元刚;;脊髓组织中五种金属元素含量测定的研究[A];中国营养学会第七届全国营养学术会议论文摘要汇编[C];1996年

2 沈忆新;;X线照射促进损伤脊髓组织修复的实验研究[A];苏州市自然科学优秀学术论文汇编(2008-2009)[C];2010年

3 林巍巍;李敏;李奕;李想;杨帆;黄月娇;王晓冬;;BMSCs和脊髓组织互相作用及机制的体外初步研究[A];中国解剖学会2012年年会论文文摘汇编[C];2012年

4 许涛;李新志;郭风劲;;磁刺激对脊髓损伤后脊髓组织c-fos基因表达的影响[A];中国康复医学会第四届会员代表大会暨第三届中国康复医学学术大会论文汇编[C];2001年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 常丽君;德开发出追踪神经再生新方法[N];科技日报;2011年

2 记者 刘向;检测疯牛病肉制品有新法[N];新华每日电讯;2004年

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 朴成东;白介素10对脊髓缺血再灌注损伤中保护作用的研究[D];吉林大学;2006年

2 孙燕;HMGB1在实验性自身免疫性脑脊髓炎病程中的作用[D];华中科技大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前9条

1 全墨缘;p-p38MAPK在实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠发病不同时期脊髓组织的表达及SB203580保护机制的研究[D];河北医科大学;2015年

2 肖一千;EAE小鼠脑及脊髓组织中IL-17及c-Maf表达与病程关系的研究[D];南昌大学;2016年

3 刘志国;脊髓手术中不同温度生理盐水冲洗对脊髓组织的影响[D];南通大学;2008年

4 郑芸鹤;丙烯酰胺对大鼠脊髓组织蛋白激酶的影响[D];山东大学;2010年

5 韩晓英;TOCP诱发OPIDN后成年母鸡大脑和脊髓组织中细胞骨架蛋白的改变[D];山东大学;2005年

6 刘佳;莱菔硫烷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑及脊髓组织HO-1及IL-17表达的影响及影响机制探讨[D];河北医科大学;2012年

7 吴芳;滤泡辅助性T细胞参与实验性自身免疫性脑脊髓炎的初步研究[D];第四军医大学;2014年

8 张彦宁;从TOCP暴露鸡脊髓组织中筛选OPIDN诱发相关蛋白[D];大连医科大学;2012年

9 吕苗苗;动脉注射丙泊酚对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及其机制的研究[D];第四军医大学;2009年

，

本文编号：1084564