MicroRNA-199a-3p调控mTOR信号通路抑制胶质瘤细胞增殖的机制研究

发布时间：2017-10-25 07:36

  本文关键词：MicroRNA-199a-3p调控mTOR信号通路抑制胶质瘤细胞增殖的机制研究

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【摘要】：研究目的:胶质瘤是最常见的高度恶性、高侵袭性的原发性恶性脑肿瘤。尽管已经过了几十年的不懈研究,但是由于肿瘤的快速增殖、高度侵袭潜能以及对放化、疗的耐受,使得肿瘤的预后仍极差,多形性胶质瘤母细胞瘤(GBM)的平均生存期仅15~18个月。越来越多的研究表明在恶性肿瘤中,微小RNA(mi RNAs)的异常表达与肿瘤进展、复发、预后密切相关。mi RNAs是一类小的非编码RNA,通过上调或下调mi RNAs的表达可以调节基因的转录后翻译水平。据报道,micro RNA-199a-3p(mi R-199a-3p)在人类多种恶性肿瘤中存在差异表达现象,mi R-199a-3p的过表达或低表达能影响哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)的功能,调控肿瘤的增殖、凋亡、侵袭等不同的生物学作用。然而,关于mi R-199a-3p在人脑胶质瘤中的表达水平、功能研究以及可能的影响机制的报道极少。因此,我们使用实时荧光定量PCR比较了mi R-199a-3p在人脑胶质瘤和非瘤脑组织的表达差异,随后进一步验探索其与人脑胶质瘤的增殖、侵袭、凋亡作用及相关机制。研究方法:我们选择了苏州大学附属第一医院神经外科自2000年至2013年术中切除的胶质瘤的组织标本61例,通过实时荧光定量PCR检测了mi R-199a-3p在标本中的表达水平;然后,在胶质瘤细胞株U87和U251中瞬时转染mi R-199a-3p上调其表达水平,随后检测上调后细胞增殖、侵袭和凋亡功能的变化。Western blot分析m TOR信号通路上相关蛋白的表达变化。结果:1.人脑胶质瘤中mi R-199a-3p,m TOR及其下游基因P70S6K的表达实时荧光定量PCR检测了6例非瘤脑组织和61例胶质瘤标本中mi R-199a-3p的表达,其表达水平在胶质瘤标本中比非瘤脑组织低,但在低级别胶质瘤组(Ⅱ级)和高级别(Ⅲ,Ⅳ级)胶质瘤组之间表达无差异(P0.05)。m TOR在胶质瘤中的表达较非瘤脑组织高(P0.01),且高级别胶质瘤组中m TOR表达水平比低级别胶质瘤组更高(P0.01)。胶质瘤中m TOR下游基因p70S6K的表达比非瘤脑组织高(P0.01),但在低级别组胶质瘤和高级别组胶质瘤之间无统计学意义(P0.05)。2.上调mi R-199a-3p表达抑制胶质瘤细胞的增殖在U87和U251两株胶质瘤细胞中上调mi R-199a-3p表达后明显抑制了细胞的增殖。流式细胞仪分析细胞周期,数据提示mi R-199a-3p增加了G1期细胞数(P0.01),降低了S期的细胞数(P0.05)。3.mi R-199a-3p表达水平的改变与凋亡、侵袭无关在mi R-199a-3p过表达的胶质瘤细胞株U87、U251中,细胞的凋亡和侵袭能力未见明显改变(P0.05);同时Western blot分析与凋亡、侵袭相关蛋白MMP2(matrix metallopeptidase 2)和caspase-3的表达,结果提示未见明显统计学意义(P0.05)。4.上调mi R-199a-3p后抑制了m TOR及其下游基因PCR结果表明在转染mi R-199a-3p的U87和U251两株胶质瘤细胞株中,m TOR表达水平明显下降(P0.01)。此外,Western blot分析和免疫荧光结果提示m TOR信号通路中m TOR、p-AKT、P70S6K和p-4E-BP1的表达在mi R-199a-3p上调组中有下降。预先经NVP-BEZ-235处理抑制m TOR表达,然后再上调mi R-199a-3p后细胞增殖改变不明显(P0.05)。结论:mi R-199a-3p在胶质瘤标本,胶质瘤细胞株U87、U251中的表达比非瘤脑组织中的表达低,具有统计学意义;在胶质瘤细胞U87、U251中,mi R-199a-3p可通过m TOR信号通路抑制肿瘤细胞增殖,发挥类似抑癌基因的作用。
【关键词】：胶质瘤 miR-199a-3p microRNA mTOR 增殖
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-13
• 参考文献11-13
• 第一部分MIR-199A-3P在人脑胶质瘤的表达及临床意义13-23
• 材料与方法13-18
• 实验结果18-20
• 讨论20-21
• 结论21
• 参考文献21-23
• 第二部分MIR-199A-3P调控AKT/MTOR信号通路的功能研究23-40
• 材料和方法23-31
• 实验结果31-36
• 讨论36-37
• 结论37
• 参考文献37-40
• 综述40-47
• 参考文献44-47
• 英文缩写一览表47-48
• 攻读学位期间公开发表的论文48-49
• 致谢49-50

【参考文献】

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1 林松;邵楠楠;范磊;马秀才;浦飞飞;邵增务;;Effect of MicroR NA-101 on Proliferation and Apoptosis of Human Osteosarcoma Cells by Targeting mTOR[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2014年06期

2 李振宇;;miRNA与肿瘤发生[J];中山大学研究生学刊(自然科学、医学版);2006年03期

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本文编号：1092735