动脉性和静脉性蛛网膜下腔出血对脑动脉平滑肌细胞电压依赖性钙通道电流作用的比较研究

发布时间：2017-10-29 20:16

  本文关键词：动脉性和静脉性蛛网膜下腔出血对脑动脉平滑肌细胞电压依赖性钙通道电流作用的比较研究

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【摘要】：[目的]自发性蛛网膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage,SAH)是各种原因引起的颅内和椎管内血管突然破裂,血液流至蛛网膜下腔的一种临床综合征,约占急性脑卒中的10.0%,是高致死率、高致残率的神经科疾病。脑血管痉挛(cerebral vasospasm, CVS)特指继发于SAH的脑血流下降,是其特异性的并发症也是SAH致死、致残的最主要危险因素。自发性蛛网膜下腔出血(SAH)的年发生率约为1/1万,其责任血管可大致分为动脉和静脉两大类。前者约占SAH的85%,多为颅内动脉瘤、血管畸形破裂以及肿瘤卒中所致；后者的原发病多为颅内静脉或静脉窦血栓、凝血功能障碍以及中脑周围非动脉瘤性SAH等。静脉性SAH具有症状轻微、脑血管痉挛发生率低和预后好等特点。由于动脉血成分与静脉血存在差异,因此我们观察了动脉性和静脉性SAH对于脑血管痉挛敏感性的差异及其血液成分对电压依赖性钙通道(voltage-dependent calcium channels, VDCCs)电流的不同调节作用,探究动脉性SAH和静脉性SAH在VDCCs电流、平滑肌静息电位和脑血流量(cerebral blood flow, CBF)调节等方面的差异,以期为更好地治疗SAH提供依据。[方法]选取36只清洁级SD大鼠(雌雄不限),按数字法随机抽样,分为动脉性SAH组(N=14只)、静脉性SAH组(N=13只)和假手术组(N=9只)。采用大鼠立体定向仪辅助下鞍上池内注射自体血制造大鼠SAH模型。实验组鞍上池内注射0.25 ml自体血,假手术组以同样方式接受等量无菌等渗盐水注射。SAH模型建立后3d行神经功能评分,处死大鼠并取脑组织称重,用荧光分光光度仪检测溶液的荧光强度并计算绝对脑血流量。在显微镜下分离大鼠脑动脉,将脑动脉移至谷氨酸盐溶液中轻柔吹打约1 min使平滑肌细胞松解分离。上述相同方法分离的细胞悬液迅速置于倒置显微镜高倍镜视野下进行细胞计数,以判断细胞膜的完整性以及细胞的存活比率。将动脉平滑肌细胞悬液滴入显微镜的记录浴槽中,进行静息电位测定。用膜片钳研究大鼠脑动脉平滑肌细胞相对表面积和VDCCs电流。[结果]鞍上池内注射自体动脉血、静脉血和生理盐水后,三组大鼠呈现的精神状态各不相同。动脉性SAH(N=14只)、静脉性SAH组(N=13只)和假手术组(N=9只)术后各项指标均有一定差异。1.动脉性SAH、静脉性SAH和假手术组OxyHb浓度有一定差异。动脉性SAH OxyHb浓度明显高于静脉性SAH组、假手术组(P0.05)。2.造模前大鼠神经功能评分均为18分,SAH后第3d动脉性SAH、静脉性SAH和假手术组神经功能有一定差异。动脉性SAH和静脉性SAH组均较假手术组评分降低(P0.05)。3.高倍镜视野下,动脉性SAH、静脉性SAH和假手术组脑动脉平滑肌细胞活细胞率(%)无差异。4.动脉性SAH、静脉性SAH和假手术组脑动脉平滑肌细胞相对表面积有一定差异。动脉性SAH平滑肌细胞相对表面积显著小于静脉性SAH、假手术组(P0.05)。5.动脉性SAH和静脉性SAH组和假手术组脑动脉平滑肌静息电位有一定差异。动脉性SAH静息电位显著低于静脉性SAH、假手术组(P0.05)。6.动脉性SAH组、静脉性SAH和假手术组的VDCCs最大电流(pA)有一定差异。当Vm=0-30 mV动脉性SAH组VDCCs电流密度显著高于静脉性SAH组、假手术组(P0.05)。7.动脉性SAH组、静脉性SAH和假手术组CBF有一定差异。动脉性SAH脑血流量显著低于静脉性SAH、假手术组(P0.05)。[结论]1.本研究显示动脉性SAH与正常大鼠脑动脉平滑肌细胞VDCCs电流相比,可引起大鼠脑动脉平滑肌细胞VDCCs电流密度增大以及VDCCs表型的变化,同时使CBF显著下降；而静脉性SAH则无此类效应。2.动脉性和静脉性蛛网膜下腔出血脑脊液氧合血红蛋白血氧浓度等血管痉挛因子的浓度不同是导致动脉性和静脉性蛛网膜下腔出血差异的重要因素。
【关键词】：蛛网膜下腔出血 脑动脉平滑肌细胞 电压依赖性钙通道 膜片钳 氧合血红蛋白 脑血流量
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.35
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 引言12-17
• 材料和方法17-21
• 1. 实验动物17
• 2. 实验药品及器材17
• 3. 实验分组及方法17-20
• 4. 统计学分析20-21
• 实验结果21-27
• 讨论27-32
• 结论32-33
• 展望33-34
• 参考文献34-38
• 综述38-52
• 参考文献47-52
• 发表文章情况52-53
• 致谢53

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本文编号：1114504